[发明专利]拟南芥中高效CRISPR-CAS9基因编辑载体及构建方法在审
| 申请号： | 201910047440.5 | 申请日： | 2019-01-18 |
| 公开（公告）号： | CN109652442A | 公开（公告）日： | 2019-04-19 |
| 发明（设计）人： | 王晓彦;陆佳运;劳康文;王碎抗;莫小为;许欣桐;陈雪梅;莫蓓莘 | 申请（专利权）人： | 深圳大学 |
| 主分类号： | C12N15/82 | 分类号： | C12N15/82;C12N15/66;C12N15/113;A01H5/12;A01H6/20 |
| 代理公司： | 哈尔滨市哈科专利事务所有限责任公司 23101 | 代理人： | 吴振刚 |
| 地址： | 518055 广东省*** | 国省代码： | 广东;44 |
| 权利要求书： | 暂无信息 | 说明书： | 暂无信息 |
| 摘要： | 本发明公开一种拟南芥中高效CRISPR‑CAS9基因编辑载体及构建方法，方法如下，挑选特定N19NGG序列，合成引物对，以pCBC‑DT1T2序列为模板，PCR扩增，用酶切PCR产物以及pEntry‑gRNA序列，回收目的片段，并连接回收产物，得到pEntry‑gRNA‑CRIS‑靶基因质粒，酶切靶基因质粒以及pCambia‑Cas9‑amiR‑RDR6序列，SEQ ID NO.4所示，连接两者回收产物，得到最终序列pCas9‑amiR‑R6‑CRIS‑靶基因，含有该转基因植株会呈现类似rdr6突变体的表型，利用这一点能够筛选出不含转基因质粒的T2代种子植株，植株出现的特定表型选中靶基因被编辑且不含转基因质粒的纯合突变体。本发明能够显著提高CRISPR‑CAS9编辑效率。 | ||
| 搜索关键词： | 靶基因 转基因质粒 回收产物 植株 拟南芥 表型 构建 酶切 质粒 纯合突变体 转基因植株 合成引物 目的片段 基因 突变体 选中 筛选 回收 | ||
【主权项】：
1.一种拟南芥中高效CRISPR‑CAS9基因编辑载体，其特征在于：包括pCambia‑Cas9‑amiR‑RDR6序列，如序列表SEQ ID NO.4所示。
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