[发明专利]高产杆状病毒的福寿螺精巢细胞系及其构建方法和用途

摘要

本发明公开了一种高产杆状病毒的福寿螺精巢细胞系及其构建方法及用途，所述福寿螺精巢细胞系为来源于福寿螺精巢组织，并且对杆状病毒高敏感的细胞系，本发明还公开了该细胞系的建立方法，以及该细胞系在杆状病毒规模化生长上的用途。该细胞系可以用来复制这类病毒，用于杆状病毒杀虫剂的规模化生产，以及构建杆状病毒表达载体系统，表达具有商业或科学价值的蛋白质，因而具有极高的商业和科研价值。

主权项

1.一种高产杆状病毒的福寿螺精巢细胞系的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)配制细胞原代培养液和细胞传代培养液；(2)选取体重20‑30克雄性福寿螺在无菌水中饲养12小时；(3)将螺浸没在质量百分比浓度为0.1％KMnO₄水溶液中，进行表面消毒10‑15分钟；(4)用无菌蒸馏水清洗福寿螺3～5次，用无菌滤纸吸干螺体表面水分；(5)将福寿螺置于用体积分数70％或75％乙醇溶液消毒过的解剖盘中，解剖福寿螺，取出福寿螺精巢组织，将精巢组织用生理盐水清洗3‑5次，再用PBS清洗2‑3次，用灭菌剪刀将精巢组织剪成0.5mm³‑1mm³的小组织块；(6)将步骤(5)处理的小组织块，置于预先盛有1ml‑1.5ml细胞原代培养液的T‑25cm²细胞培养瓶中，加入胰蛋白酶消化，而后用细胞原代培养液充分悬浮，离心收集沉淀；(7)向沉淀中加入细胞原代培养液，将培养瓶置于培养箱内，28℃恒温培养；(8)过夜后，待组织贴壁后，再加入2ml‑2.5ml细胞传代培养液，(9)每隔5‑7天吸出50％～70％量的细胞传代培养液，并同时换入吸出量的新的细胞传代培养液，直至扩展并增殖的细胞充满培养瓶；(10)把新增殖出的单个细胞，连同全部的细胞培养液吸出放入新培养瓶中，并加入新的细胞传代培养液，而原含有组织块的培养瓶中再加入同吸出量同样多的新的细胞传代培养液，两个培养瓶放入培养箱中培养，细胞开始传代，细胞系建立成功。