[发明专利]用于纯化重组抗体片段的方法有效
| 申请号： | 201880028983.6 | 申请日： | 2018-03-23 |
| 公开（公告）号： | CN110582510B | 公开（公告）日： | 2023-09-15 |
| 发明（设计）人： | 拉胡尔·沙拉德·布拉布姆;K·M·加尼 | 申请（专利权）人： | 科学与工业研究委员会 |
| 主分类号： | C07K16/00 | 分类号： | C07K16/00;C07K16/24 |
| 代理公司： | 中科专利商标代理有限责任公司 11021 | 代理人： | 高丽娜;张莹 |
| 地址： | 印度*** | 国省代码： | 暂无信息 |
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| 摘要： | 本发明涉及从在微生物细胞中表达的包涵体中纯化重组抗体片段的方法。更具体地，本发明涉及用于从微生物细胞中表达的包涵体中纯化重组人源化(rHu)抗体片段雷珠单抗的方法。 | ||
| 搜索关键词： | 用于 纯化 重组 抗体 片段 方法 | ||
【主权项】：
1.一种用于纯化来自重组宿主细胞的表达为包涵体或可溶形式的重组人源化(rHu)雷珠单抗的抗体片段的方法，所述方法包括：/n(a)溶解来自重组宿主细胞的含有rHu雷珠单抗的轻链和重链的包涵体以获得溶解的rHu雷珠单抗；/n(b)重折叠步骤(a)的所述溶解的rHu雷珠单抗以获得重折叠的rHu雷珠单抗；/n(c)通过超滤浓缩步骤(b)的所述重折叠的rHu雷珠单抗以获得浓缩的重折叠的雷珠单抗；/n(d)将步骤(c)的所述浓缩的重折叠/可溶形式的rHu雷珠单抗进行多元层析，所述层析方法包括：/n(i)将具有范围为4.0至10.0的pH的步骤(c)的浓缩的重折叠的rHu雷珠单抗进料至多元层析树脂上以捕获rHu雷珠单抗并用缓冲液除去杂质，所述缓冲液包含20mM至50mM TrisHCl和0mM至150mM NaCl或20mM至50mM乙酸盐和0mM至150mM NaCl，所述缓冲液具有范围为4.0至10.0的pH；/n(ii)在洗脱缓冲液存在下洗脱rHu雷珠单抗至洗脱池中，所述洗脱缓冲液包含20mM至50mM乙酸盐和0mM至1000mM氯化钠或20mM至50mM乙酸盐和0mM至1000mM氯化钠，所述洗脱缓冲液具有范围为4.0至10.0的pH，/n其中纯化的雷珠单抗具有少于5％的未折叠或错误折叠形式的雷珠单抗和少于2％的聚集形式的雷珠单抗；/n(iii)用缓冲液将来自步骤(ii)的所述洗脱池的rHu雷珠单抗进料到多元层析树脂上以捕获rHu雷珠单抗，所述来自步骤(ii)的所述洗脱池的rHu雷珠单抗具有范围为4.5至6.5的pH，所述缓冲液包含20mM至50mM乙酸盐和0mM至150mM NaCl，所述缓冲液具有范围为4.0至6.5的pH；/n(iv)用洗脱缓冲液洗脱rHu雷珠单抗，所述洗脱缓冲液包含20mM至50mM乙酸盐和0mM至1000mM NaCl，所述洗脱缓冲液具有范围为4.0至6.5的pH；/n其中纯化的rHu雷珠单抗具有少于0.1％的未折叠或错误折叠形式的rHu雷珠单抗和少于0.3％的聚集形式的rHu雷珠单抗。/n
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