[发明专利]多指标联用比较固定化链亲和素分离性能的方法

摘要

多指标联用比较固定化链亲和素分离性能的方法，特征如下：生物素化牛小肠粘膜碱性磷酸酶缩写为Bio‑AP；固定化链亲和素对Bio‑AP饱和结合量为其对生物素化大分子饱和结合量；用显色团、单个生物素基团、磺酸或羧酸及骨架连接成1000 Dalton以下水溶性生物素化小分子显色探针，固定化链亲和素对生物素化小分子显色探针结合容量换算出活性亚基量即活性蛋白量；固定化链亲和素对生物素化大分子饱和结合量与其活性亚基量的比值为比活性；测定对设定量Bio‑AP全分离时固定化链亲和素最小需要量；对固定化链亲和素的参考品，在相同条件下分别测定各自上述四个性能指标的均值和标准差；所选参考品与样品的多个性能指标进行比较，四个指标都统计无差异则二者分离性能一致。

主权项

1.多指标联用比较固定化链亲和素分离性能的方法，特征在于：(1) 选择如下四个指标表征固定化链亲和素的分离相关性能，具体是，固定化链亲和素对生物素化大分子探针的饱和结合量、固定化链亲和素的活性亚基量即其活性蛋白量、固定化链亲和素对生物素化大分子饱和结合量相对于其活性蛋白量的比值为其比活性、固定化链亲和素对设定量生物素化大分子探针全分离的最小需要量；(2) 用生物素化牛小肠粘膜碱性磷酸酶为生物素化大分子探针，光度法测定固定化链亲和素对生物素化大分子饱和量、固定化链亲和素对设定量生物素化大分子探针全分离的最小需要量表示分离效价；用分子量1000 Dalton以下含显色团、羧基或磺酸增溶的水溶性生物素化小分子显色探针，光度法测定固定化链亲和素活性亚基量，并用于推算固定化链亲和素的比活性；(3) 对固定化链亲和素的参考品和样品，在相同条件下分别测定各自上述四个指标的均值和标准差；参考品重复取样不少于5次进行测定，样品至少重复取样1次进行测定；(4) 实践中，按如下所述，判断固定化链亲和素的参考品与样品分离性能是否一致：选上述四个指标中任两个、任三个或四个联用进行统计比较，如样品的每个所选指标与参考品的相同指标在P<0.05置信限水平都无统计差异，则二者分离性能一致；或者，选上述四个指标中任两个、任三个或四个联用进行简化比较，当样品的每个所选指标两次测定相差小于10%、其均值与参考品相同指标均值的偏差都小于参考品标准差的2倍，则二者分离性能一致；如参考品与样品的比活性一致而其它任意指标有差异，则二者有效成分的浓度有差异；通过调整样品的稀释度或浓缩度，获得分离性能与参考品无差异的样品。