[发明专利]一种高效内切木聚糖酶生产菌的筛选方法及其应用

摘要

本发明提供一种高效内切木聚糖酶生产菌的筛选方法及其应用，包括：(1)样品来源；(2)菌株筛选；(3)木聚糖酶发酵液的制备等步骤，本发明首先在生长培养基进行菌株的分离培养，再利用双层平板法进行菌株的筛选，上层培养基中添加Azo‑xylan(Birchwood)作为筛选底物，该方法可以解决先培养微生物，再加入刚果红溶液进行颜色反应过程中菌落之间发生混杂的问题，还可以解决在制备平板时加入刚果红，再进行微生物培养过程中出现的假阳性问题。

主权项

1.一种高效内切木聚糖酶生产菌的筛选方法及其应用，其特征在于：包括以下步骤：(1)样品来源：堆置发酵时间为3d，发酵温度为40℃的猪粪与甘蔗叶混合堆肥20g，初始C/N比为25:1，含水率为60％，初始pH为8.0得到发酵物；(2)菌株筛选：取1g步骤(1)中的发酵物加入10mL的无菌水中，然后梯度稀释成10^‑6‑10^‑8，取100μL涂布于生长培养基上，35℃培养3‑4d后倒上层筛选培养基，35℃继续培养1d，加入2ml 95％的乙醇，用接种针挑选有水解圈的菌落划线培养，重复步骤(2)直至得到纯化菌株；将其命名为Saccharothrix variisporea YJ现保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏号为：GDMCC NO:60442；(3)木聚糖酶发酵液的制备：步骤(2)筛选到的纯培养菌株，接种至20ml生长培养基中，于35℃，160rpm培养过夜，作为制备木聚糖酶发酵液的种子液；取1ml种子液接种至100ml无菌发酵培养液中，于40℃，160rpm，震荡培养6d后，12000rpm，离心5min，取上清，既得发酵产木聚糖酶的发酵液；(4)将得到的木聚糖酶发酵液对天然底物磨碎至150目的玉米芯进行降解，经过5‑7h的处理后，可以从玉米芯获得还原糖。