[发明专利]一种新鲜烟叶中内源水溶性B族维生素的检测方法

摘要

本申请属于烟草代谢组学中的烟草内容物检测技术领域，具体涉及一种新鲜烟叶中内源水溶性B族维生素的检测方法。该检测方法针对新鲜烟叶中内源水溶性B族维生素进行检测，具体用于分别或者同时对9种B族维生素中一种或任意几种进行定性或者定量检测。本申请采用液质联用分析新鲜烟叶样品中相关维生素B族成分含量时，具有：前样品处理简单，定量定性时分辨率高、灵敏度高、快速简便、干扰小、适用于复杂基质样品等优点，尤其是可对较宽浓度范围全九种植物内源性B族维生素同时测定，而且测定时间较短，一个样本检测仅需18min，并且该检测方法灵敏度高、精密度好、加标回收率高，因此具有较好的实用价值和推广应用意义。

主权项

1.一种新鲜烟叶中内源水溶性B族维生素的检测方法，其特征在于，该检测方法针对新鲜烟叶中内源水溶性B族维生素进行检测，具体用于分别或者同时对维生素B1、维生素B2、维生素B3、维生素B5、维生素B6、维生素B7和维生素B9、维生素B12和维生素B16中一种或任意几种进行定性或者定量检测，该方法具体包括如下步骤：（一）对新鲜烟叶进行预处理（1）首先，将新鲜烟叶打碎，备用；（2）其次，以0.5 mmol/L盐酸溶液作为提取液，每20mg粉碎烟叶样品中，加入提取液0.5~1.5mL，35~42℃进行避光萃取30~60min；（3）最后，将上述混合体系离心，取上清液，过滤，取滤液进行测定；（二）利用HPLC‑MS/MS绘制标准曲线（1）首先，利用超纯水配制维生素B1、维生素B2、维生素B3、维生素B5、维生素B6、维生素B7和维生素B9、维生素B12和维生素B16母液以及其混合标准工作溶液；（2）其次，进行液相色谱、质谱检测；液相色谱检测分析时，具体操作参数为：色谱柱：Waters公司ACOUTITY UPLC HSS T3柱，规格2.1×100mm，1.8μm；色谱分析时：柱温40℃；进样量：1μL；以流动相A/B相进行梯度洗脱：流动相A，10mmol/L的甲酸铵水溶液，流动相B，0. 1%甲酸‑甲醇溶液；流速：0.3 mL min‑1；质谱分析时，质谱条件设置为：离子源：电喷雾离子源；正离子扫描；多反应监测；干燥气温度：290℃，干燥气流量：12 L min‑1；雾化器压力：40 psi；鞘气温度：200℃，鞘气流量：11L min‑1；正离子电离模式下毛细管电压：4 kV，负离子电离模式下喷雾电压：3.5 kV；各B族维生素样品MRM模式下特征碎片离子如下：（3）最后，分别配制用于正离子扫描模式的系列浓度的混合标准溶液，并进行测定，以目标组分定量离子的峰面积平均值Y对质量浓度X进行线性回归分析，最终得到线性方程；（三）定性或定量测定采用步骤（二）中相同测定方法对步骤（一）中样品进行测定，然后利用步骤（二）中所得线性曲线计算获得步骤（一）中样品中的维生素B族具体类型和含量。