[发明专利]一种稳定同位素标记腐霉利内标试剂的制备方法

摘要

本发明涉及食品中农药残留检测用稳定同位素标记腐霉利内标试剂的制备方法，属于食品安全检测用标准物质研发领域。以1,2‑环丙烷二甲酸二酯为原料，在溶剂中与强碱性试剂反应，再加入稳定同位素标记碘甲烷，生成稳定同位素标记1,2‑二甲基‑1,2‑环丙烷二甲酸二酯，再水解得到稳定同位素标记1,2‑二甲基‑1,2‑环丙烷二甲酸，再与酰基化试剂反应，生成稳定同位素标记1,2‑二甲基‑1,2‑环丙烷二甲酰氯，再与3,5‑二氯苯胺反应，得到稳定同位素标记腐霉利。该发明的制备路线短，产品质量能满足液相色谱串联质谱法所需内标试剂的技术要求。研制稳定同位素标记腐霉利内标试剂对食品安全监管中农药残留检测工作有重要意义。

主权项

1.一种食品安全中农药残留检测用稳定同位素标记腐霉利内标试剂的制备方法，该稳定同位素标记腐霉利内标试剂的化学结构如式(I)所示：其中，(I)中X为¹²C或¹³C，Y为H或D，其特征在于，制备步骤如下：(1)在有机溶剂存在条件下，在氮气保护条件下，加入1,2‑环丙烷二甲酸二酯，然后加入强碱性试剂，在0℃～‑80℃条件下，反应0.5～6小时；无需处理，直接加入稳定同位素标记碘甲烷，在该温度下继续反应2～10小时，反应混合溶液用水淬灭，用酸调节pH值至酸性，水相用有机溶剂萃取，合并有机相，依次用水洗涤，饱和碳酸氢钠溶液洗涤，饱和氯化钠溶液洗涤，加入干燥剂干燥，减压蒸馏除去溶剂，残留物经柱层析得到稳定同位素标记1,2‑二甲基‑1,2‑环丙烷二甲酸二酯；(2)将步骤(1)得到的稳定同位素标记1,2‑二甲基‑1,2‑环丙烷二甲酸二酯加入到无机碱的水溶液中，在10℃～100℃条件下，反应2～24小时；TLC跟踪反应原料反应完全后，反应液用酸调节pH值至酸性，水相用有机溶剂萃取，合并有机相，依次用水洗涤，饱和碳酸氢钠溶液洗涤，饱和氯化钠溶液洗涤，加入干燥剂干燥，减压蒸馏除去溶剂，残留物经柱层析得到稳定同位素标记1,2‑二甲基‑1,2‑环丙烷二甲酸；(3)将步骤(2)所得稳定同位素标记1,2‑二甲基‑1,2‑环丙烷二甲酸在氮气保护下，加入酰基化试剂，在0℃～100℃条件下反应2～12小时；TLC跟踪反应原料反应完全后，减压蒸馏除去酰基化试剂，得到稳定同位素标记1,2‑二甲基‑1,2‑环丙烷二甲酰氯；(4)在有机溶剂中加入3,5‑二氯苯胺和催化剂，在‑30℃～30℃条件下反应0.5～2小时；加入步骤(3)所得稳定同位素标记1,2‑二甲基‑1,2‑环丙烷二甲酰氯，在该温度下继续搅拌0.5～3小时，然后升温至室温反应12～24小时；TLC跟踪反应原料反应完全后，反应混合溶液用水淬灭，分液，水相用有机溶剂萃取，合并有机相，依次用水洗涤，饱和碳酸氢钠溶液洗涤，饱和氯化钠溶液洗涤，加入干燥剂干燥，减压蒸馏除去溶剂，残留物经柱层析得到稳定同位素标记腐霉利。