[发明专利]一种富含多糖类的植物基因组DNA的提取方法在审
| 申请号： | 201811393338.2 | 申请日： | 2018-11-21 |
| 公开（公告）号： | CN109439652A | 公开（公告）日： | 2019-03-08 |
| 发明（设计）人： | 刘艳艳;马义峰;张洪波;孙子奎 | 申请（专利权）人： | 上海派森诺生物科技股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 上海天翔知识产权代理有限公司 31224 | 代理人： | 吕伴 |
| 地址： | 200030 上海市*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种富含多糖类的植物基因组DNA的提取方法，包括如下步骤：使用液氮研磨；加入预冷的CTAB‑free buffer，巯基乙醇，充分震荡混匀；放置冰上，控制温度在4℃，离心，弃掉上清；根据粘稠度再用PBS清洗一次，加入SDS溶液，巯基乙醇，混匀；然后水浴，期间颠倒混匀；待冷却后，加入等体积苯酚：氯仿，上下颠倒混匀；离心n，取上清，加入RNase A，上下颠倒混匀，室温放置；加入异丙醇，颠倒混匀，室温放置或者低温放置，离心，弃上清，使用75％乙醇清洗，加入适量体积的灭菌水溶解。本发明的方法对于富有多糖类的植物基因具有更好的提取效果，在基因完整性及后续的纯度来说都比常规的方法提取更好。 | ||
| 搜索关键词： | 混匀 糖类 颠倒 植物基因组DNA 室温放置 巯基乙醇 富含 低温放置 方法提取 体积苯酚 液氮研磨 乙醇清洗 植物基因 常规的 灭菌水 异丙醇 粘稠度 氯仿 水浴 预冷 冷却 溶解 震荡 基因 | ||
【主权项】：
1.一种富含多糖类的植物基因组DNA的提取方法，其特征在于，包括如下步骤：使用液氮在55‑65Hz的范围下研磨30‑300S；加入1ml预冷的CTAB‑free buffer，20ul巯基乙醇，充分震荡混匀；放置冰上2‑3min，控制温度在4℃，以2000‑5000rpm的速度，离心5‑20分钟，弃掉上清；使用PBS溶液进行清洗去除多糖类杂质；接入65℃预热的SDS溶液500‑1000ul，1％‑4％巯基乙醇，混匀；然后放入65℃水浴中20‑60min，期间至少颠倒混匀3次；待冷却后，加入等体积苯酚：氯仿，上下颠倒30‑40次混匀；以12000rpm的速度，离心5‑15min，取上清，加入1‑5ul RNase A，上下颠倒混匀，室温放置5‑30min；加入0.6‑1倍体积的异丙醇，颠倒混匀，室温放置10‑20min或低温放置不低于一小时，10000‑12000rpm离心10‑30分钟，弃上清，；使用75％乙醇清洗一次，倒掉乙醇，待乙醇挥发干净，加入适量体积的灭菌水溶解。
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