[发明专利]一种环境雌激素对家蚕发育毒性测试方法

摘要

本发明公开了一种环境雌激素对家蚕发育毒性测试方法，包括以下步骤：首先是采用口腔灌胃注射含有一系列浓度的受试物于饥饿处理2h的5龄期家蚕幼虫；20min后对灌胃的家蚕解剖取组织器官。毒性终点包括家蚕中肠中谷胱甘肽还原酶活性系数、抗超氧阴离子自由基活力。通过染毒组与对照组的毒性终点比较，确定该受试物对家蚕发育的毒性。研究环境雌激素4‑壬基酚对家蚕幼虫期中肠发育的影响，以确定其对家蚕幼虫期发育毒性的剂量－效应关系。采用本发明技术方案，能对环境雌激素壬基酚产生多个生物效应终点，评价家蚕暴露在雌激素环境浓度水平下存在的潜在风险，是一种相对快速、简便、灵敏的检测方法。

主权项

1.一种环境雌激素对家蚕发育毒性测试方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）配制壬基酚母液，并将其置于4℃冰箱避光保存备用；（2）将壬基酚母液用稀释液稀释成三组不同的浓度：0.02、0.20、2.0 g/L，置于4℃冰箱避光保存；（3）将实验分为四组，包括步骤（2）所述的三种壬基酚浓度的染毒组和空白对照组，每组又设制3个重复组，每组设制15头家蚕，将家蚕饥饿处理2h后，用100 μL平头微量注射器吸取每组溶剂，针头探入蚕口腔注射给药100 μL；20 min后，在超净工作台上进行处理，解剖取中肠，中肠置于冰冷的生理盐水中清洗后装EP管，‑20℃保存；（4）将步骤（3）已取好的中肠组织块制备中肠组织匀浆；（5）将步骤（4）制得的中肠组织匀浆4℃离心，取上清液后分别测定谷胱甘肽还原酶活性系数以及抗超氧阴离子活力；（6）数据处理：将实验数据采用SPSS16.0 for Windows软件对染毒组与对照组中肠组织的谷胱甘肽还原酶活性系数和抗超氧阴离子活力进行显著性分析。