[发明专利]一种环境雌激素对家蚕发育毒性测试方法

权利要求书

1.一种环境雌激素对家蚕发育毒性测试方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）配制壬基酚母液，并将其置于4℃冰箱避光保存备用；

（2）将壬基酚母液用稀释液稀释成三组不同的浓度：0.02、0.20、2.0 g/L，置于4℃冰箱避光保存；

（3）将实验分为四组，包括步骤（2）所述的三种壬基酚浓度的染毒组和空白对照组，每组又设制3个重复组，每组设制15头家蚕，将家蚕饥饿处理2h后，用100 μL平头微量注射器吸取每组溶剂，针头探入蚕口腔注射给药100 μL；20 min后，在超净工作台上进行处理，解剖取中肠，中肠置于冰冷的生理盐水中清洗后装EP管，-20℃保存；

（4）将步骤（3）已取好的中肠组织块制备中肠组织匀浆；

（5）将步骤（4）制得的中肠组织匀浆4℃离心，取上清液后分别测定谷胱甘肽还原酶活性系数以及抗超氧阴离子活力；

（6）数据处理：将实验数据采用SPSS16.0 for Windows软件对染毒组与对照组中肠组织的谷胱甘肽还原酶活性系数和抗超氧阴离子活力进行显著性分析。

2.根据权利要求1所述的一种环境雌激素对家蚕发育毒性测试方法，其特征在于，所述步骤（1）中配制壬基酚母液的具体方法为：首先称取1176 mg的壬基酚溶于50 mL的无水乙醇中，配制成20 g/L的壬基酚溶液，将此溶液用0.22 μm微孔滤膜过滤后，作为壬基酚母液转入试剂瓶用膜封口后置于4℃冰箱避光保存。

3.根据权利要求1所述的一种环境雌激素对家蚕发育毒性测试方法，其特征在于，所述步骤（2）中的稀释液为超纯水和无水乙醇的混合溶液，经稀释后的每组壬基酚溶液中的无水乙醇的体积分数均为10%。

4.根据权利要求1所述的一种环境雌激素对家蚕发育毒性测试方法，其特征在于，所述步骤（4）中制备中肠组织匀浆的具体步骤为：将已取好的中肠组织块在冰冷的生理盐水中漂洗，除去其中的血液和丝腺杂质，滤纸拭干；准确称取中肠组织块重量，放入事先灭好菌并冷藏的研钵中，加入液氮研磨，研磨充分后加入中肠组织块重量9倍的预冷0.9%生理盐水制成10倍中肠组织匀浆。

5.根据权利要求1所述的一种环境雌激素对家蚕发育毒性测试方法，其特征在于，所述步骤（5）中的离心转速为3500 r/min，离心时间为10 min。

6.根据权利要求1-5任一项所述的一种环境雌激素对家蚕发育毒性测试方法，其特征在于，所述的壬基酚为4-壬基酚。