[发明专利]一种层析和超滤分离技术制备依诺肝素钠的方法

摘要

本发明公开一种层析和超滤分离技术制备依诺肝素钠的方法。肝素钠依次经过季铵盐盐化、苄基酯化、碱性降解、过滤除杂、氧化脱色等处理得到依诺肝素钠粗品；依诺肝素钠粗品经过离子交换层析、超滤分离、冻干得到符合要求的依诺肝素钠精品。本发明利用离子交换层析技术对依诺肝素钠的分子量及分布进行有效控制；通过超滤分离技术与层析技术有效的结合，达到浓缩和脱盐的目的，减少了有机溶剂的使用，同时缩小了冻干的体积，提高了产能，节约了成本。

主权项

1.一种层析和超滤分离技术制备依诺肝素钠的方法，其特征在于方法步骤如下：(1)肝素苄索氯铵盐的制备：将肝素钠水溶液与苄索氯铵水溶液以：1：2～3的体积混合，在低于50℃条件下进行反应30nim～60nim,离心，收集沉淀，在50～60℃条件下干燥，得到含水量低于5％的肝素季铵盐；(2)肝素苄基脂的制备：将(1)得到的肝素季铵盐加入3～7倍质量的N,N‑二甲基甲酰胺中，在30～70℃条件下搅拌至充分溶解，加入0.5～4倍质量的氯化苄，保持搅拌，反应20～40小时，过滤，向滤液中加入9～15％体积的醋酸钠甲醇溶液，析出沉淀，离心，收集沉淀，用醋酸钠甲醇溶液洗涤，烘干，得到脂化率大于11％的肝素苄基脂；(3)肝素苄基脂的裂解：将(2)得到的肝素苄基脂溶于纯化水中，在40～65℃条件下搅拌加入5％～10％质量的氢氧化钠，反应30～90nim，用2M盐酸调pH至6～8，过滤，加入10％体积的氯化钠溶液，加入4倍体积的甲醇，放置12小时，收集沉淀，得到依诺肝素钠粗品；(4)依诺肝素钠的氧化脱色：向(3)得到依诺肝素钠粗品中加入依诺肝素钠粗品5～15倍质量的纯化水，完全溶解后，加入0.2％～1％体积的过氧化氢，反应6～12小时，过滤，加入10％质量的氯化钠，加入4倍体积的甲醇，干燥，得到水分低于5％的依诺肝素钠；(5)离子交换层析：取降解氧化后的依诺肝素钠，用缓冲液溶解制成浓度为30～40mg/ml的依诺肝素钠溶液，调pH至6.5～8.0，调电导至1～10ms/cm；安装Q‑XL层析柱，用平衡液平衡至流出液pH及电导与依诺肝素钠溶液一致，用依诺肝素钠溶液上样，上样结束后用少量平衡液冲洗，再用洗涤液即0.4～0.5M NaCl溶液清洗，观察流出液对280nm波长紫外光吸收值曲线即UV280曲线，待曲线平稳后，用洗脱液即1.5～2.0M NaCl溶液进行洗脱，根据UV280曲线收集洗脱峰对应的洗脱流出液；(6)超滤浓缩，冻干：收集的洗脱流出液用0.45μm的滤芯过滤，滤液用孔径小于1kD的超滤膜进行超滤浓缩。