[发明专利]一种层析和超滤分离技术制备依诺肝素钠的方法

说明书

本发明公开一种层析和超滤分离技术制备依诺肝素钠的方法。肝素钠依次经过季铵盐盐化、苄基酯化、碱性降解、过滤除杂、氧化脱色等处理得到依诺肝素钠粗品；依诺肝素钠粗品经过离子交换层析、超滤分离、冻干得到符合要求的依诺肝素钠精品。本发明利用离子交换层析技术对依诺肝素钠的分子量及分布进行有效控制；通过超滤分离技术与层析技术有效的结合，达到浓缩和脱盐的目的，减少了有机溶剂的使用，同时缩小了冻干的体积，提高了产能，节约了成本。

技术领域

本发明涉及一种生化药品工艺方法，具体为一种层析和超滤分离技术制备依诺肝素钠的方法。

背景技术

依诺肝素钠是低分子量肝素钠的一种，其通用名：Enoxaparin。依诺肝素钠是由猪肠豁膜提取的肝素钠经酯化后得到的肝素苄基酯钠衍生物通过碱裂解生成的低分子量肝素钠。它由许多复杂的未定性的低聚糖组成。按照目前的了解，大部分的低聚糖在糖链的非还原末端具有一烯醇毗喃糖酸。肝素是世界上最有效和临床用量最大的抗凝血药物，主要应用于心脑血管疾病和血液透析治疗，其中，其在血液透析治疗中是唯一有效的特效药物，陆续发现肝素在血液系统疾病、心脏病、体外循环手术、血液净化疗法、显微外科、肺内科、肾病、产科、儿科、眼科等12个大的临床学的40余种疾病的治疗中都发挥了较好的医疗作用，而且这样的研究还远没有结束，肝素完全可能衍生成为治疗更多疾病的药物。此外，低分子肝素是由肝素原料药作为原料进一步加工成的一大类抗血栓的药物，具有更为广泛的临床医学用途，成为治疗急性静脉血栓和急性冠脉综合征(心绞痛、心肌梗塞)等疾病的首选药物。由于低分子量肝素类产品在临床使用时可以克服一些普通肝素的缺点，如选择性强、对动脉和静脉血栓形成有较强的抑制作用，在抗血栓剂量下，凝血时间无明显改变；抗血栓作用显著增强；人体药动学性质显著改善；临床疗效确切，使用安全方便，对血小板的副作用。

由于依诺肝素钠广阔的市场前景和现有生产技术存在重均分子控制不到位，能耗过大，污染严重等诸多问题，开发一种能够适合工业生产使用的快速简便的生产工艺成为急需解决的问题。

发明内容

本发明的目的是提一种层析和超滤分离技术制备依诺肝素钠的方法，该方法通过采用离子交换层析，超滤浓缩等得到高纯度的依诺肝素钠产品，且该方法自动化程度高，操作便捷，环境污染小，克服原有生产工艺有机溶剂使用量大，重均分子量控制难，冻干机体积大等技术问题。

为了实现上述目的，本发明采用了以下技术方案：一种层析和超滤分离技术制备依诺肝素钠的方法，其特征在于方法步骤如下：

(1)肝素苄索氯铵盐的制备：将肝素钠水溶液与苄索氯铵水溶液以：1：2～3的体积混合，在低于50℃条件下进行反应30nim～60nim,离心，收集沉淀，在50～60℃条件下干燥，得到含水量低于5％的肝素季铵盐；

(2)肝素苄基脂的制备：将(1)得到的肝素季铵盐加入3～7倍质量的N,N-二甲基甲酰胺中，在30～70℃条件下搅拌至充分溶解，加入0.5～4倍质量的氯化苄，保持搅拌，反应20～40小时，过滤，向滤液中加入9～15％体积的醋酸钠甲醇溶液，析出沉淀，离心，收集沉淀，用醋酸钠甲醇溶液洗涤，烘干，得到脂化率大于11％的肝素苄基脂；

(3)肝素苄基脂的裂解：将(2)得到的肝素苄基脂溶于纯化水中，在40～65℃条件下搅拌加入5％～10％质量的氢氧化钠，反应30～90nim，用2M盐酸调pH至6～8，过滤，加入10％体积的氯化钠溶液，加入4倍体积的甲醇，放置12小时，收集沉淀，得到依诺肝素钠粗品；

(4)依诺肝素钠的氧化脱色：向(3)得到依诺肝素钠粗品中加入依诺肝素钠粗品5～15倍质量的纯化水，完全溶解后，加入0.2％～1％体积的过氧化氢，反应6～12小时，过滤，加入10％质量的氯化钠，加入4倍体积的甲醇，干燥，得到水分低于5％的依诺肝素钠；