[发明专利]一种汞离子的检测方法

摘要

本发明提供了一种将碎片DNA形成DNA酶的无酶放大技术和血红素‑氧化石墨烯复合物催化显色反应联用的汞离子检测方法。其中，所述血红素‑氧化石墨烯复合物表面吸附大量DNA片段，防止聚集，所述DNA片段由DNA酶循环切割核酸分子发卡环形成，所述DNA酶是两个分裂的DNA酶序列通过T‑Hg2+‑T相互作用形成。大量血红素‑氧化石墨烯复合物催化显色反应使得上清液显示出深蓝色。通过紫外可见吸收光谱测定，即可计算Hg2+浓度。该方法显示50pM至1200pM的线性范围。极限检测可低至33pM。该方法可快速灵敏地检测Hg2+。

主权项

1.一种汞离子检测方法，包括如下步骤：(1)血红素‑氧化石墨烯复合物的合成，采用现有技术合成H‑GNs，上述血红素‑氧化石墨烯复合物简称H‑GNs；(2)将核酸分子发卡序列5’‑CACCACAAATTCTCTCTrAGGACAAAAAAAGT GGTG‑3’加热到90℃保持5分钟，然后冷却2小时至室温形成核酸分子发卡结构；(3)DNA酶的形成，在10mM Tris‑HCl(pH 7.5)缓冲中将购得的50nM碎片DNA酶序列1和碎片DNA酶序列2与Hg2+的待测液和200nM步骤(2)所得核酸分子发卡混合反应，形成DNA酶结构，上述碎片DNA酶序列1为5’‑TTTTGTCAGCGATCCGGAATTGTGGTTGGTGCGGCACCCATGTGAG AGAA‑3’，上述碎片DNA酶序列2为5’‑TTTTGTCAGCGATCCGGAACTCCTTCCTCTTCGGCACCCATGTGAG AGAA‑3’；(4)核酸分子发卡环的剪切，将步骤(3)所得溶液和10mM Mg2+溶液混合反应15分钟；(5)H‑GNs催化剂的形成，用Tris‑HCl溶液稀释混合步骤(1)所得H‑GNs和步骤(4)，温育并加入适量NaCl，离心取上清液，该上清液即H‑GNs催化剂；(6)显色和测定，将步骤(5)所得H‑GNs催化剂用于催化含3,3',5,5'‑四甲基联苯胺和H2O2的Tris‑HCl缓冲溶液的显色反应，测定其UV‑vis吸收光谱，并用标准曲线法计算Hg2+浓度，上述3,3',5,5'‑四甲基联苯胺简称TMB。