[发明专利]一种具有强抗氧化活性的酸枣叶总黄酮发酵产物的制备方法及其应用

摘要

一种具有强抗氧化活性的酸枣叶总黄酮发酵产物的制备方法及其应用，属于植物提取发酵技术领域，可解决酸枣野生资源的需求量增加而出现的酸枣叶资源浪费的问题，该方法通过将粉末化的酸枣叶总黄酮加入培养好的肠道菌孵育液中进行培养后制得。分别应用于DPPH、O2‑•自由基的清除、Fe3+的还原及其对H2O2诱导PC12细胞的细胞活力。本发明以拓宽酸枣仁生产加工副产品酸枣叶的利用率，并解决因对酸枣野生资源的需求量增加而出现的酸枣叶资料浪费的问题。

主权项

1.一种具有强抗氧化活性的酸枣叶总黄酮发酵产物的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：第一步，酸枣叶总黄酮的制备：将酸枣叶浸泡在乙醇溶液中，回流提取两次，合并滤液，挥干滤液中的溶剂，得到酸枣叶提取物固体，将酸枣叶提取物固体通过大孔树脂层析柱，收集洗脱液，挥干洗脱液的溶剂，得到酸枣叶总黄酮提取粉末；第二步，酸枣叶总黄酮溶液的配制：将酸枣叶总黄酮提取粉末溶解于无菌水中，得到酸枣叶总黄酮溶液；第三步，配制厌氧菌培养液：称取GAM肉汤加热溶解至蒸馏水中，得到液体培养基，分装后，在液体培养基中添加氯化血红素和维生素K1，高压灭菌，得到厌氧菌培养液；第四步，制备肠道菌液：取3名健康男性新鲜粪便和3名健康女性新鲜粪便混合均匀后，与DPBS以质量体积比为1g：10mL的比例混合均匀，用两层脱脂棉纱布过滤，将滤液离心，取上清液，得到肠道菌液；第五步，制备肠道菌孵育液：将厌氧菌培养液与肠道菌液按比例混合，厌氧培养，得到肠道菌孵育液；第六步，重复上述步骤，分别制备22份肠道菌孵育液，向其中20份肠道菌孵育液中分别加入酸枣叶总黄酮溶液，在厌氧培养箱中分别培养若干时间，用水饱和的正丁醇萃取，停止反应，得到具有强抗氧化活性的酸枣叶总黄酮发酵产物，再用水饱和的正丁醇萃取两次，合并3次离心后的上清液，减压浓缩蒸干，‑20℃保存备用，另外2份肠道菌孵育液加入无菌水作为空白对照，在厌氧培养箱中培养24h，采用同样的方法萃取，合并3次离心后的上清液，减压浓缩蒸干，‑20℃保存备用。