[发明专利]一种田间采用抗性平板筛选和试纸条鉴定组合分离青枯病菌的方法

摘要

一种田间采用抗性平板筛选和试纸条鉴定组合分离青枯病菌的方法，包括以下步骤：（1）抗性筛选平板的准备：在实验室配制抗性培养基，超净工作台上按照20ml/皿倒平板，等冷却后采用封口膜密封。（2）采样：采用消毒镰刀砍取青枯病株发病和健康组织交界处约20cm长烟杆，放入塑料袋密封。（3）划线培养，（4）菌种再分离：在培养1‑2天后，将长有众多菌种的平板上挑取白色的菌斑，在新抗性平板上采用3线法进行重新划线培养。（5）菌株鉴定：采用青枯病菌试纸条，在T位和C位都存在阳性反应的确认为青枯病菌。该方法操作简便，成功率高，能够有效地在高温高湿环境条件下，在田间进行大量青枯病菌的初步分离。

主权项

1.一种田间采用抗性平板筛选和试纸条鉴定组合分离青枯病菌的方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）抗性筛选平板的准备在实验室进行抗性平板的制备，首先将新鲜红花大金元烟叶采用磨样机粉碎后，按照5g/L的浓度加入1L去离子水中，再加入胰蛋白胨5g，酵母浸膏25g，葡萄糖1g，琼脂粉15g，将pH值调整至6.5后121℃20min灭菌，等培养基温度降低至50℃，每升培养基加入500μl 1% 多粘菌素B，100μl 1% 氯霉素，500μl 1% 放线菌酮，超净工作台上按照20ml/皿倒平板，等冷却后采用封口膜密封；（2）采样选取青枯病发病田块，采用酒精消毒过的镰刀，砍取青枯病株，发病和健康组织交界处往上约15cm，往下约5cm的烟杆，从一个田块采集约15株，放入质控袋密封，并标记地点，将密封袋放置于田间阴凉处；（3）划线培养将截取烟杆段放置1个小时后，其横截面会有白色菌脓流出，然后采用牙签挑取菌脓，直接在步骤（1）制备的抗性平板上进行采用3线法进行划线后，采用封口膜对平板进行密封；（4）菌种分离在培养1‑2天后，将长有众多菌种的平板上挑取白色的菌斑，在新的抗性平板上采用3线法进行重新划线，封口膜密封，室温放置进行培养；（5）菌株鉴定青枯病菌菌株的鉴定采用青枯病菌检测试纸条，挑取分离的较纯菌斑，放入试纸条自带的缓冲抽提液，放置10分钟后，采用试纸条进行检测，在T位和C位都存在阳性的确认为青枯病菌菌株。