[发明专利]干细胞用胰蛋白酶终止液制备方法及干细胞传代方法

摘要

本发明提供了一种干细胞用胰蛋白酶终止液制备方法，包括以下步骤：S1、收集组织；S2、物理破碎；S3、超声破碎；S4、过滤除菌。一种干细胞传代方法，包括以下步骤：A1、制备脐带间充质干细胞或制备胎盘间充质干细胞；A2、制备的脐带间充质干细胞或胎盘间充质干细胞融合达80%后应及时进行传代。由于采用了上述技术方案，与现有技术相比，本发明的优点是：不含外源血清，可用于无血清培养体系；非动物源性，没有外源性病毒污染的风险；与被消化的贴壁干细胞来源于同一个体组织，不引入外源性蛋白，不会增加临床免疫反应的风险。制作成本低，操作简单。制作原料是分离干细胞后废弃的胎盘和脐带组织，节约资源。

主权项

1.干细胞用胰蛋白酶终止液制备方法，其特征在于：包括以下步骤：S1、收集组织，收集脐带或胎盘组织，作为制备胰蛋白酶终止液的原料；S2、物理破碎，将收集的组织先预制成块状，然后将组织块放入组织粉碎机中粉碎，彻底粉碎至组织呈稀糊状，用含Ca2+、Mg2+离子、PH为6.5‑7.0的无菌PBS溶液稀释，充分混合均匀，然后用100目细胞筛过滤，除去其中的组织块，最后收集所有滤液及洗液；S3、超声破碎，将收集到的滤液破碎，超声条件为30%‑40%功率下超声破碎2‑3s，停3‑9s，循环20‑30次，然后1000‑2000rpm离心5‑10min除去未破碎细胞，去沉淀，重复离心2‑3次，取上清液；S4、过滤除菌：收集到的上清液，先用0.40‑0.50um的微孔滤膜过滤，再用0.20‑0.25um的微孔滤膜过滤。