[发明专利]一种转化原人参三醇型皂苷生成C25-OH衍生物的方法

摘要

本发明涉及一种转化原人参三醇型皂苷生成C25‑OH衍生物的方法，属于天然产物结构修饰方法。选取生物转化菌种：冬虫夏草菌，配置种子液、转化培养基，将种子液加入已灭菌的转化培养基中，无菌滤膜封口，放入恒温摇床中，恒温培养，向转化培养基加入皂苷底物，转化6～8天后，向反应体系中加入等体积的正丁醇试剂，搅匀，将目标产物与其他副产物分离，最终得到PPT型人参皂苷的C25‑OH衍生物纯品。本发明采用的技术为生物转化法，催化体系为生物安全性和遗传稳定性较高的食用真菌，催化底物专属性强，结构的变化属于定向转化，副产物少，化学背景简明清晰，利于该类成分的大规模制备和开发应用。

主权项

1.一种转化原人参三醇型皂苷生成C25‑OH衍生物的方法，其特征在于，包括下列步骤：(1)选取生物转化菌种：冬虫夏草菌(Cordyceps sinensis/Ophiocordyceps Sinensis)(2)生物转化菌种的种子液配置1)生物转化菌种的斜面培养制备PDA斜面培养基，将复苏或活化的冬虫夏草菌接入到制备好的斜面后，放入恒温恒湿培养箱中，25～30℃培养3～4天，即可取出使用；2)种子液的培养制备种子液培养基，用无菌0.9％氯化钠水溶液冲洗3～4天菌龄的冬虫夏草菌斜面，通过在显微镜下观察血小球计数板读书，将洗下来的孢子液稀释至107孢子/毫升，接下来将孢子悬液以体积比2.5％～7.5％接入到制备好的种子液培养基中，在150～180转/分钟、25～30℃的恒温摇床中进行培养2～3天后停止发酵，可直接使用，或在4℃下保存，备用；(3)生物转化过程1)转化培养基的配制碳源：15～25g/L；氮源：2.5～7.5g/L；在容器中按比例加入各固体试剂和蒸馏水，然后搅拌至固体全部溶解，121℃灭菌15～25分钟，取出摇匀，放入无菌接种室中放凉备用；2)生物转化参数及产物处理生物转化参数：将种子液按照5％～7.5％(V/V)的接菌量加入已灭菌的转化培养基中，无菌滤膜封口，放入恒温摇床中，在25℃～30℃的温度下恒温培养2～3天，向转化培养基加入0.5g/L～1g/L的皂苷底物，转化6～8天后，向反应体系中加入等体积的正丁醇试剂，超声、振荡或搅匀、终止反应；产物处理方法：用等体积的正丁醇萃取3次、合并正丁醇溶液，回收溶剂，溶质称重，用40～60倍体积(ml/g)的20％～25％色谱乙腈溶液溶解样品，在反相C18制备色谱柱上进行分离，色谱条件为20％～25％的色谱乙腈溶液等度洗脱，即可将目标产物与其他副产物分离，最终得到PPT型人参皂苷的C25‑OH衍生物纯品。