[发明专利]中国人B7-H5表达阳性胰腺癌细胞系sipanc-1076建立方法

摘要

本发明公开了一种中国人B7‑H5表达阳性胰腺癌细胞系sipanc‑1076建立方法，包括以下步骤：1.标本采集，2.Organoid类器官完全培养基配置，3.组织消化，4.胰腺癌Organoid类器官建立与培养，5.细胞传代与培养。本发明有益的效果：本发明构建的中国人胰腺癌细胞系sipanc‑1076生物学特征为胰腺导管腺癌，具有B7‑H5呈阳性表达的这一其他商业化人胰腺癌细胞系不具备的独特特点，且其成瘤性良好，可应用于胰腺癌肿瘤免疫逃逸及中国人胰腺癌相关基因谱系分析等研究。

主权项

1.一种中国人B7‑H5表达阳性胰腺癌细胞系sipanc‑1076建立方法，其特征在于：该方法包括如下步骤：(1)、标本采集并制成组织块；(2)、组织消化：将上述小组织块用5mlPBS重悬，加入700ul灭菌水配置的IV型胶原酶，工作浓度1437u/ml，25ul的无菌CaCl2溶液，工作浓度1M，25‑30mgBSA粉末，摇床37℃，200转/分，孵育15分钟后，将上述组织悬液自摇床取出，70um级滤网过滤除去未消化组织块，将滤过的细胞悬液加10mlPBS洗涤后，1500转/分4℃离心5分钟，弃去上清，加入5ml裂红液冰上裂解5分钟，再次加10mlPBS洗涤，1500转/分4℃离心5分钟，弃去上清后待用；(3)、胰腺癌Organoid类器官建立与培养：前一天将低生长因子基质胶于4℃解冻。取500ul液态基质胶，重悬胰腺癌原代细胞沉淀，待基质胶凝固后，置于玻片小室或培养板中，添加5ml完全培养基；4‑6天时，基质胶中长出圆环形类器官结构；10‑12天时，取出基质胶，10mlPBS反复冲洗，胰酶消化基质胶，70um级滤网过滤除去未消化组织块，将滤过的细胞悬液加10mlPBS洗涤后，1500转/分4℃离心5分钟，弃去上清；(4)、细胞传代与培养：将上述细胞沉淀加入新的无菌细胞培养基，培养基采用IMDM培养基配置，含终浓度10％FBS(v/v％)及青霉素/链霉素双抗各100mg/ml，放置培养箱培养，培养条件为37℃，5％CO2(v/v％)，定期观察细胞生存情况，细胞长满至70‑80％经胰酶消化后转移至25cm2培养瓶培养传代。