[发明专利]一种用牛血清蛋白原位修饰金芯片的方法

摘要

本发明涉及一种牛血清蛋白原位修饰金芯片的方法。石英晶体微天平(QCM)和表面等离子体共振仪(SPR)技术是实时、原位研究生物大分子在固体界面的吸附是重要工具，前者同时检测石英晶体频率的变化(对应感应器上的重量)和吸附层的能量耗散值(对应感应器上薄膜的结构)的变化，后者只研究“干物质”的变化。本发明采用原位修饰的方法在QCM和SPR金芯片上成功修饰一层牛血清蛋白，制备得到牛血清蛋白传感器，为牛血清蛋白的界面吸附建立了一个平台。

主权项

1.一种牛血清蛋白原位修饰金芯片的方法，其特征在于包括如下步骤：步骤(1)：所用芯片为金表面的QCM或SPR芯片，实验前将金芯片清洗后用氮气吹干，然后放入紫外‑臭氧清洗机照射10‑30min；步骤(2)：用75％乙醇为溶剂配制40mM的11‑巯基十一烷酸(MUA)与3‑巯基丙酸(MPA)；步骤(3)：用pH为7.4的0.05mM的磷酸盐缓冲溶液配制2mM的1‑乙基‑(3‑二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDC)和5mM的N‑羟基硫代琥珀酰亚胺钠盐(NHSS)的溶液，和50μg/ml的牛血清蛋白溶液；步骤(4)：将步骤(1)清洗并照射后的芯片放置在QCM或SPR流动池内；步骤(5)：首先以0.1ml/min的流速通入75％的乙醇溶液把基线走平；步骤(6)：待平稳后，把步骤(2)中配制的MPA和MUA溶液按体积比10∶1的比例混合后，以0.1ml/min的流速通入QCM或SPR流动池，待检测信号平衡后通入75％乙醇冲洗；步骤(7)：接下来把步骤(3)中配制的EDC和NHSS溶液以体积比1∶1混合，然后以0.1ml/min的流速通入系统，15min后停止通液体；步骤(8)：一小时后重新启动泵，以0.1ml/min的流速通入pH为7.4的0.05mM的磷酸盐缓冲溶液；步骤(9)：待信号平稳后以0.1ml/min的流速通入步骤(3)配制的牛血清蛋白溶液，待牛血清蛋白吸附平衡后通入磷酸盐缓冲溶液冲洗去未牢固结合的牛血清蛋白，最后得到牛血清蛋白原位修饰的金芯片。