[发明专利]一种细菌耐氯性的评估方法

摘要

本发明公开了一种细菌耐氯性的评估方法，包括采用贫营养驯化技术对菌株进行处理，然后对驯养后的菌液计数、稀释、消毒，通过测定不同作用时间点的消毒剂余量以及细菌存活数量，通过消毒公式计算细菌灭活率为99％的CT值，并与参照菌株大肠埃希氏菌CT值大小比较，实现对试验菌株的耐氯性评价。本发明包含菌株的复苏、驯养、菌液的制备以及消毒实验参数的设计和标准的实验流程，量化了实际水体中细菌的耐氯能力，为饮用水的微生物安全评估以及耐氯微生物风险控制提供更准确的理论依据，为水厂消毒工艺的改进提供支撑，从而更好的保证饮用水的生物安全性。

主权项

1.一种细菌耐氯性的评估方法，其特征在于，采用菌株贫营养驯养处理——静态消毒实验——灭活特性分析方法测定细菌灭活率为99％的CT值，其方法步骤如下：(1)驯养：将冻存管中保存的菌液加入营养肉汤中，震荡培养，对冻存的菌株进行复苏；取1mL复苏后的菌液加入500mL灭菌的管网水中，置于培养箱中培养；(2)菌浓度计数：将驯养后的菌液进行梯度稀释，选10³、10⁴、10⁵稀释倍数采用营养琼脂倾注平板法对样品进行计数，37℃培养24h，计数平板上菌落数，乘以对应的稀释倍数，即为驯养后的菌液浓度；(3)静态消毒实验：根据步骤(2)中计数的菌液浓度，用管网水对其进行稀释，制备成菌浓度为10⁵CFU/mL～10⁷CFU/mL的样品，加入消毒剂进行消毒实验；分别计数消毒剂加入0min、5min、10min、20min、30min、60min、120min、240min后的细菌存活数量及消毒剂余量；(4)CT值计算：采用线性回归方法计算细菌灭活率为99％CT值，计算公式为：式中：N—反应时间为t时的细菌存活量，CFU/mL；N₀—灭菌之前的细菌浓度，CFU/mL；k—反应速率常数；t—反应时间，min；c—消毒剂浓度，mg/L；CT值以消毒剂浓度和反应时间的乘积表示，CT值表示消毒剂的消毒效果，CT值越小，消毒剂的消毒效果越好；(5)耐氯性评价：以大肠埃希氏菌标准菌株作为参照菌株，若待评价菌株灭活率为99％CT值小于大肠埃希氏菌菌株灭活率为99％CT值，评价为无耐氯性；若待评价菌株灭活率为99％CT值大于大肠埃希氏菌菌株灭活率为99％CT值，依据灭活率为99％CT值得大小评价其耐氯性强弱，灭活率为99％CT值越大，其耐氯性越强；步骤(1)中所述冻存菌株复苏条件为加入5mL营养肉汤，37℃震荡培养24h；菌液采用管网水驯养，22℃培养7d；所述管网水的pH值为7.2～7.4；步骤(3)所述消毒剂的投加浓度为2.5mg/L余氯浓度；步骤(5)耐氯性评价中所述的参照菌株为大肠埃希氏菌标准菌株ATCC8739，菌株来源为中国工业微生物菌种保藏管理中心。