[发明专利]普鲁士蓝纳米MRI示踪剂及其制备方法和应用

摘要

本发明公开一种普鲁士蓝纳米MRI示踪剂及其制备方法和应用，提供一种无毒、特异性和敏感性良好的基于普鲁士蓝纳米颗粒的MRI示踪剂，结合了半胱氨酸修饰的β‑淀粉样蛋白42的马来酰亚胺化的普鲁士蓝纳米颗粒，可以探测阿尔兹海默病人脑内沉积的Aβ，并在MRI上清晰成像。本发明以Aβ同源多肽作为脑内β淀粉样蛋白的靶向物，以普鲁士蓝为显像剂，制备能通过血脑屏障并能与Aβ特异性结合的MRI示踪剂。本发明作为分子影像的检测剂可以为今后AD早期诊断和评估疗效方面提供新的手段。

主权项

1.一种普鲁士蓝纳米MRI示踪剂的制备方法，其特征在于，步骤如下：1）制备半胱氨酸修饰的β‑淀粉样蛋白42在β‑淀粉样蛋白42上第28位的赖氨酸和第29位的甘氨酸之间插入含有巯基的半胱氨酸，合成半胱氨酸修饰的β‑淀粉样蛋白42，其序列是：DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNK(Cys)GAIIGLMVGGVVIA。 2）制备马来酰亚胺化的普鲁士蓝纳米颗粒将0.5mM柠檬酸的FeCl3·6H2O去离子水混合液和柠檬酸的1mM K4Fe(CN)6去离子水在60℃下混合液逐滴混合，持续搅拌5min，加入0.005 mM聚醚酰亚胺溶液，持续搅拌4小时，然后离心分离，收集沉淀并用丙酮和去离子水洗涤，用二甲基亚砜重悬，即得氨基化的普鲁士蓝纳米颗粒；将马来酸酐的二甲亚砜溶液加入到上述制备的溶液中，持续搅拌1~3天，离心分离，洗涤，重悬，得溶液A；将N‑（2‑羟乙基）马来酰亚胺的N,N‑二甲基甲酰胺溶液加入到溶液A中，持续搅拌，离心分离，洗涤，用磷酸盐溶液重悬，即得马来酰亚胺化的普鲁士蓝纳米颗粒；3）制备结合了半胱氨酸修饰的β‑淀粉样蛋白42的马来酰亚胺化的普鲁士蓝纳米颗粒将步骤2)制备的马来酰亚胺化的普鲁士蓝纳米颗粒溶于4ml的PBS中，然后将步骤1）制备的半胱氨酸修饰的β‑淀粉样蛋白42和步骤2）制备的马来酰亚胺化的普鲁士蓝纳米颗粒按质量比8：1‑12：1加入到上述溶液中，4 ℃混匀悬培2‑6 h，离心，洗涤，最后用磷酸盐溶液重悬，置于4 ℃冰箱保存待用，得到结合了半胱氨酸修饰的β‑淀粉样蛋白42的马来酰亚胺化的普鲁士蓝纳米颗粒。