[发明专利]一种蓝莓花青素的高效提取及纯化方法

摘要

本发明公开了一种蓝莓花青素的高效提取及纯化方法，本发明同时将混合酶和超声波联合辅助提取蓝莓中的花青素，让混合酶在超声波环境中加速破坏细胞结构，从而提高蓝莓花青素的出汁率，再用乙醇溶剂将蓝莓花青素提取出来，最后将花青素粗提取液通过预先处理的硅胶层析柱，得到高纯度花青素。该提取方法不仅可以大大缩短提取时间，最大程度地将有效成分提取出来，显著提高提取率，而且操作简单易行、生产工艺参数稳定、产品质量稳定，适合工业化生产。

主权项

1.一种蓝莓花青素的高效提取及纯化方法，其特征在于：依次按照以下步骤进行：一、蓝莓的预处理：1)取蓝莓干果置于粉碎机中进行粉碎；2)将粉碎后的蓝莓干粉取出，过50‑70目筛；3)收集过筛后的蓝莓干粉装于洁净的塑料袋中，放置冰箱保存备用；二、混合酶联合超声粗提：1)分别取蓝莓干粉和混合酶并按照90‑110:1的重量配比混合后加入洁净且干燥的锥形瓶中，所述混合酶包括有纤维素酶和果胶酶，所述纤维素酶和果胶酶的重量配比为4:6；2)向锥型瓶中加入体积分数为40‑80％的乙醇溶液搅匀，调节pH＝4‑5，密封；其中蓝莓干粉与乙醇溶液的固液比为1:28‑32g/mL；3)将密封后的锥形瓶放入超声波清洗机中，超声波清洗机的温度设定为45‑55℃，功率为750‑950W，超声时间为20‑40min；4)所述蓝莓干粉经过超声波破壁和减压过滤操作，分离滤渣后去除，得到花青素粗提取液；三、硅胶层析柱预处理：1)称量50‑70g硅胶置于烧杯中，向烧杯中加入浓盐酸使浓盐酸刚好淹没硅胶面，浸泡9‑11h；2)用蒸馏水洗涤浸泡盐酸后的硅胶，当洗涤的水呈中性后，继续冲洗0.2‑0.7h，除尽硅胶上附着的氯离子；3)晾干除尽氯离子的硅胶，在烘箱中100‑120℃的条件下活化1‑3h；四、花青素的纯化：1)取一只洁净且干燥的色谱柱，将活化后的硅胶通过漏斗均匀地注入色谱柱中，期间用橡胶锤轻轻地敲击色谱柱柱身，使色谱柱中的硅胶紧致且结实，保持硅胶上表面平整；2)色谱柱中注满硅胶后，在色谱柱上端安置分液漏斗一，将乙醇溶液加入分液漏斗一中，打开分液漏斗一下端活塞和色谱柱下端活塞，使乙醇溶液沿色谱柱内壁缓慢流入，并从色谱柱下端缓慢流出，所述乙醇溶液流速和分液漏斗一流速相同；待硅胶中的空气经乙醇溶液排尽后，停止注入乙醇溶液并关闭色谱柱下端活塞，拿开分液漏斗一并保持乙醇溶液高出硅胶顶面1‑3mm，此过程中一直保持硅胶上表面平整；3)在色谱柱上端安置分液漏斗二，将花青素粗提取液加入分液漏斗二中，打开分液漏斗二下端活塞和色谱柱下端活塞，使花青素粗提取液沿色谱柱内壁均匀缓慢地注入，始终保持硅胶上表面平整，此时花青素吸附到硅胶中；待分液漏斗二中的花青素粗提取液全部流出后，关闭色谱柱下端活塞并拿走分液漏斗二；4)在色谱柱上端安置分液漏斗三，将洗脱剂乙醇加入分液漏斗三中，打开分液漏斗三下端活塞和色谱柱下端活塞，加入洗脱剂乙醇，保持乙醇的加入流速和下端流出流速相同，用锥形瓶收集下端收集流出液；5)对收集的流出液进行减压溶缩，除去流出液中的乙醇后，得到蓝莓花青素。