[发明专利]高分子量丝素蛋白链段的制备方法

摘要

本发明公开了一种高分子量丝素蛋白多肽链段的制备方法，采用蚕茧壳脱胶溶解后，加入还原剂还原丝素蛋白中半胱氨酸，将丝素蛋白中的H链（390kDa）和L链（25kDa）之间的二硫键打开，并且在氮气保护的还原性环境下，采用半透膜分离方法，透析去除低分子量部分的丝素蛋白多肽链，获得丝素蛋白中的H链成分。本发明的这种方法分离效率高，不会影响丝素蛋白多肽的生物活性，丝素蛋白中的H链成分，免疫原性低，可用于作为生物医用材料，具有巨大的市场前景和发展潜能。

主权项

1.一种高分子量丝素蛋白多肽链段的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）脱胶：将原料蚕茧壳脱胶烘干后得到纯丝素纤维；（2）溶解：将所述步骤（1）中获得的纯丝素纤维用溴化锂溶液溶解，得到丝素蛋白溴化锂溶液，并将所述的丝素蛋白溴化锂溶液冷却至室温；（3）还原：将第一还原剂加入到所述步骤（2）中冷却至室温的丝素蛋白溴化锂溶液中，常温反应1‑20h；（4）透析：将所述步骤（3）中还原后的丝素蛋白溴化锂溶液灌入一透析袋中，将装有所述还原后的丝素蛋白溴化锂溶液的透析袋置于第一透析液中透析36h以上，每隔2‑6h更新一次第一透析液，而后再将所述的透析袋置于第二透析液中继续透析24h以上，每隔2‑6h更新一次第二透析液，第二透析液为去离子水，其中第一透析液和第二透析液的温度均为4‑8℃；其中，所述的透析袋由截留分子量为100‑300 kDa的半透膜制成；其中，所述的第一透析液采用如下方法配制而成：向去离子水中，先通氮气去除所述去离子水中的溶解氧，然后往其中加入第二还原剂，再调节pH值至pH为7‑9，制得弱碱性的第一透析液；（5）抽取：完成所述步骤（4）的透析后，抽取所述透析袋内的溶液，即获得所述高分子量丝素蛋白多肽链段的水溶液。