[发明专利]一种兰花基因转化方法在审
申请号: | 201810866445.6 | 申请日: | 2018-08-01 |
公开(公告)号: | CN109136256A | 公开(公告)日: | 2019-01-04 |
发明(设计)人: | 杨凤玺;金建鹏;朱根发;郭阿瑾 | 申请(专利权)人: | 广东省农业科学院环境园艺研究所 |
主分类号: | C12N15/82 | 分类号: | C12N15/82;A01H5/00;A01H6/62;A01H4/00 |
代理公司: | 广州科粤专利商标代理有限公司 44001 | 代理人: | 刘明星 |
地址: | 510650 广东省*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | 本发明公开了一种兰花基因转化方法,该方法以兰花的芽或茎段作为外植体进行原球茎诱导,直至原球茎的直径长至0.2~0.5cm;将得到的原球茎进行预培养后浸泡于OD600=0.4~0.6的农杆菌溶液中侵染,再转移至共培养基中避光培养;将共培养后的原球茎多余的农杆菌去除后,转移至增殖培养基上进行培养,得到抗性原球茎;将抗性原球茎转移至芽诱导培养基上进行培养,直至得到5~6cm高的墨绿色小苗进行炼苗移栽。所述的兰花基因转化方法具有操作简便、转化周期短、转化效率高、成本较低的优点,尤其适合兰花体内基因功能验证。为获得抗病/抗逆/提前开花,改变花色/花型和叶色的竹叶兰以及其他兰科植物奠定基础。 | ||
搜索关键词: | 原球茎 兰花基因 农杆菌 转化 抗性 兰花 墨绿色 芽诱导培养基 原球茎诱导 增殖培养基 避光培养 功能验证 共培养基 兰科植物 体内基因 转化效率 外植体 预培养 竹叶 花色 花型 茎段 炼苗 侵染 去除 小苗 叶色 浸泡 抗病 移栽 开花 | ||
【主权项】:
1.一种兰花基因转化方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)原球茎诱导:以兰花的芽或茎作为外植体进行原球茎诱导,直至原球茎长至直径0.2~0.5cm;(2)共培养:将步骤(1)得到的原球茎进行预培养,然后浸泡于OD600=0.4~0.6的农杆菌溶液中侵染,侵染完成后将原球茎转移至共培养基中避光培养,所述的共培养基每升含有花宝一号3g、6‑BA 2.0mg、NAA 0.2mg、AS 200μmol,余量为水;(3)原球茎筛选:将步骤(2)共培养后的原球茎洗涤除菌,去除多余农杆菌后,转移至增殖培养基上进行培养,得到抗性原球茎;所述的增殖培养基每升含有花宝一号3g、6‑BA 3.0mg、NAA 0.3mg、潮霉素5mg,头孢霉素500mg,余量为水;(4)将步骤(3)得到的抗性原球茎转移至芽诱导培养基上进行培养,直至得到5~6cm高的小苗,然后进行炼苗移栽,所述的芽诱导培养基每升含有花宝一号3g、NAA 0.5mg、潮霉素5mg,头孢霉素500mg,余量为水。
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- 邹雪;王西瑶;黄雪丽;余金龙;李立芹;倪甦;刘帆;余丽萍;彭洁;杨兰淅;唐晓;邸雪妮;邓孟胜 - 四川农业大学
- 2016-11-14 - 2019-10-25 - C12N15/82
- 本发明涉及一种用于马铃薯茎段体胚高效再生及遗传转化的培养基,所述培养基包括1.0mg/L的6‑BA、0.2mg/L的TDZ、0.05mg/L的2,4‑D,以及0.1mg/L的GA3;还涉及一种用于马铃薯茎段体胚高效再生及遗传转化的方法,包括步骤:(1)预培养;(2)农杆菌侵染和共培养;(3)筛选培养;以及(4)生根培养。本发明以取材广泛易得的马铃薯试管苗茎段为外植体,建立茎段的体胚高效再生及遗传转化的培养基,可获得90%~100%的芽分化效率,同时改进培养方式、调节农杆菌侵染浓度,提高了转化和筛选效率,经过30d左右的筛选即可获得大量转基因株系,整体所需周期大大缩短。
- 水稻CIPK2基因在调控根系生长和氮素吸收中的应用-201611209856.5
- 张志兴;李鹏辉;李忠;陈鸿飞;林文雄 - 福建农林大学
- 2016-12-24 - 2019-10-25 - C12N15/82
- 本发明提供水稻CIPK2基因在调节水稻根系生长和氮素吸收中的应用,通过对水稻CIPK2的根系特异表达植株的表型进行分析,在低氮条件下,CIPK2根系特异表达植株与野生型相比,根系明显变大,有效分蘖数增加2‑3个,正常氮条件下,二者差异不显著。根系特异表达CIPK2植株与野生型在低氮条件下表型差异明显,尚无该基因相关作用报道;通过根系特异表达CIPK2植株的表型推测根系特异表达CIPK2基因可以促进水稻根系的生长,提高水稻在低氮条件下对氮素的吸收,该基因功能的研究结果对提高作物产量,减少氮肥的使用有指导意义。
- 利用CRISPR/Cas9系统定点修饰ALS基因获得抗除草剂水稻的系统及其应用-201510854747.8
- 夏兰琴;孙永伟;赵云德;马有志;吴传银;张欣 - 中国农业科学院作物科学研究所
- 2015-11-30 - 2019-10-25 - C12N15/82
- 本发明公开了利用CRISPR/Cas9系统定点修饰ALS基因获得抗除草剂水稻的系统及其应用。本发明的用于植物基因组定点修饰的系统,含有用于植物基因组定点修饰的载体和供体DNA;所述用于植物基因组定点修饰的载体含有Cas9蛋白表达盒、gRNA表达盒和供体DNA;所述gRNA表达盒编码两种gRNA,所述两种gRNA分别靶向于目的植物的靶DNA的两个靶位点;所述靶DNA中待定点修饰片段位于所述两个靶位点之间。利用本发明的系统定点修饰ALS基因获得抗除草剂水稻的技术体系,无脱靶效应,为在水稻和其它作物中利用此系统进行基因的定点修饰提供了依据,为改良其它重要农作物的农艺性状提供基础。
- 具有增加的除草剂耐性的植物-201780087003.5
- R·阿朋特;S·特雷施;D·马萨;M·维切尔;T·塞萨尔;J·保利克 - 巴斯夫农业公司
- 2017-12-18 - 2019-10-25 - C12N15/82
- 本发明涉及包含编码突变PPO多肽的多核苷酸的植物或植物部分,所述多核苷酸的表达赋予植物或植物部分对除草剂的耐性。
- 专利分类