[发明专利]植物转基因细胞制备方法在审
| 申请号： | 201810733939.7 | 申请日： | 2018-07-05 |
| 公开（公告）号： | CN108977458A | 公开（公告）日： | 2018-12-11 |
| 发明（设计）人： | 米铁柱;张国栋;刘佳音;单贞;王晶;张佩 | 申请（专利权）人： | 青岛袁策集团有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/82 | 分类号： | C12N15/82;C12N5/10;A01H5/00;A01H6/46 |
| 代理公司： | 北京华仁联合知识产权代理有限公司 11588 | 代理人： | 李冰 |
| 地址： | 266000 山东省青岛市李*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本申请公开了一种植物转基因细胞制备方法，其连接体系包括：10XT4连接酶buffer 1μL；T4连接酶1μL；目的片段(35S启动子)2μL；pCAMBIA1300双元载体5μL；双蒸水定容到10μL；16℃条件下连个过夜。本发明方法可以在植物转基因初期可以观察到转基因是否成功的一种快捷的报告基因检测方法，为后续的高效率的阳性植株筛选提供了依据。 | ||
| 搜索关键词： | 植物转基因 报告基因检测 转基因细胞 目的片段 双元载体 细胞制备 阳性植株 高效率 连接酶 双蒸水 种植物 转基因 定容 制备 筛选 观察 申请 成功 | ||
【主权项】：
1.一种植物转基因细胞制备方法，其特征在于，包括以下步骤：第一步，以含有DsRED片段的质粒为模板，利用引物进行扩增，获得DsRED片段；第二步，以pCAMBIA1300双元载体质粒为模板，扩增获得含有X ba I酶切位点的35S启动子片段；第三步，将引入X ba I酶切位点的DsRED片段插入到pCAMBIA1300双元载体上；第四步，将引入X ba I酶切位点的35S启动子连接到第三步已经连接上DsRED基因的pCAMBIA1300载体上；第五步，将含有35S启动子和DsRED基因的pCAMBIA1300载体的融合质粒导入到农杆菌中，形成可以用于介导转化植物细胞的工程菌；第六步，利用上述工程菌转化水稻的愈伤组织；第七步，通过对第六步中转化的愈伤组织培养后，筛选制备转基因成功的植物细胞。
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