[发明专利]CRISPR-Cas9高效敲入嵌合抗原受体基因到T细胞特定基因组位点的方法及应用有效
| 申请号： | 201810634963.5 | 申请日： | 2018-06-20 |
| 公开（公告）号： | CN110616187B | 公开（公告）日： | 2021-12-03 |
| 发明（设计）人： | 彭作翰;李玏 | 申请（专利权）人： | 西安桑尼赛尔生物医药有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N15/864;C12N15/113;A61K35/17;A61P35/00;A61P35/02;A61P31/18;A61P37/02 |
| 代理公司： | 中科专利商标代理有限责任公司 11021 | 代理人： | 关旭颖 |
| 地址： | 710119 陕西省西安*** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | 本发明涉及CRISPR‑Cas9高效敲入嵌合抗原受体基因到T细胞特定基因组位点的方法及其应用。本发明具体涉及一种将CAR基因精确敲入到T细胞目的基因组DNA的方法，所述方法包括a)采用基因编辑物质剪切目的基因组DNA，其中所述目的基因组DNA位于基因启动子区后，起始密码子和其所处的外显子3端之间；b)将CAR基因克隆至修复模版载体后导入T细胞，细胞以同源重组方式修复被剪切的目的基因组DNA，从而将CAR基因嵌入，其中所述修复模版载体为腺相关病毒载体。该方法可应用于各种CAR‑T细胞制备。 | ||
| 搜索关键词： | crispr cas9 高效 嵌合 抗原 受体 基因 细胞 特定 基因组 方法 应用 | ||
【主权项】：
1.一种将CAR基因精确敲入到T细胞目的基因组DNA的方法，所述方法包括一：/na)采用基因编辑物质剪切目的基因组DNA，其中所述目的基因组DNA位于基因启动子区后，起始密码子和其所处的外显子3端之间；/nb)将CAR基因克隆至修复模版载体后导入T细胞，细胞以同源重组方式修复被剪切的目的基因组DNA，从而将CAR基因嵌入，其中所述修复模版载体为腺相关病毒载体。/n或二：/na)将CAR基因克隆至修复模版载体后导入T细胞；/nb)采用基因编辑物质剪切目的基因组DNA，其中所述目的基因组DNA位于基因启动子区后，起始密码子和其所处的外显子3端之间；/nc)细胞以同源重组方式修复被剪切的目的基因组DNA，从而将CAR基因嵌入，其中所述修复模版载体为腺相关病毒载体。/n
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