[发明专利]一种双壳贝类精子质量检测的方法

摘要

本发明提供了一种双壳贝类精子质量检测方法，该方法结合荧光染料双染与流式细胞术来检测双壳贝类精子质量，包括如下步骤：首先调整精液浓度，然后以透膜的荧光染料及不透膜的荧光染料与待测精液进行染色，室温孵育，流式细胞术检测，得出检测结果，所述透膜的荧光染料能够与线粒体膜结合，不透膜的荧光染料可以穿过破损的细胞膜，并与胞内的核酸特异性结合。本发明通过一次检测可同时获得多个参数结果，不仅能够清晰地区分不同状态的精子并显示其比例，得出精子死亡率、存活率、质膜受损率以及具线粒体活性比例，还可以避免主观因素造成的精确率较低的现象，确保检测结果的准确性。

主权项

1.一种双壳贝类精子质量检测的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：（1）精液制取：选择发育饱满的个体，解剖镜检，选出性腺发育好的雄性个体，用吸管吸取精子置于灭菌海水中；（2）荧光染液配制：将PI和Rh123分别溶于超纯水中，储存；（3）精液染色：取一定量精液，加入两种上述荧光染液混合，放置、离心，洗涤，重悬，再进行流式细胞仪检测；（4）流式细胞仪检测结果：经PI/Rh123染色和FCM检测的精子分布在不同的象限：R1表示质膜破坏线粒体无活性的死精子，R2表示质膜破裂但线粒体仍具有活性，也就是即将死亡的精子，R3表示质膜正常但无线粒体跨膜电位的精子，R4为正常的活精子。