[发明专利]具有多籽粒簇生性状的转基因水稻的构建方法有效
| 申请号： | 201810442678.3 | 申请日： | 2018-05-10 |
| 公开（公告）号： | CN110484555B | 公开（公告）日： | 2021-03-23 |
| 发明（设计）人： | 童红宁;张晓星;刘大普;殷文超 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院作物科学研究所 |
| 主分类号： | C12N15/82 | 分类号： | C12N15/82;C12N15/29;C12N15/62;C07K19/00;A01H5/10;A01H6/46 |
| 代理公司： | 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 | 代理人： | 王文君;黄爽 |
| 地址： | 100081 北*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明提供具有多籽粒簇生性状的转基因水稻的构建方法，其是利用已公开发表的水稻GSK2基因定点突变形式，通过在基因N末端融合3×Flag标签序列的方法，在水稻中转基因过表达使其形成融合蛋白，即可获得多粒簇生的水稻穗型。与野生型相比，籽粒大小及植株高度基本不变。在N末端融合GFP标签或不融合标签均无法获得多籽粒簇生表型，且会造成籽粒变小，株高降低。因此，在GSK2蛋白突变体的N末端融合3×Flag的策略在水稻穗型改良中具有一定的实际应用潜力。 | ||
| 搜索关键词： | 具有 籽粒 簇生 性状 转基因 水稻 构建 方法 | ||
【主权项】：
1.具有多籽粒簇生性状的转基因水稻的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：/n1)提取水稻幼苗或叶片总RNA，反转录为cDNA；/n2)以步骤1)得到的cDNA为模板，GSK2FL-F和GSK2FL-R为引物，进行PCR扩增，得到PCR产物；/n3)以上述PCR产物作为模板，GSK2FL-F和GSK2-2m-R为引物，进行PCR扩增，得到产物mGSK2N；/n同时，以上述PCR产物作为模板，GSK2-2m-F和GSK2FL-R为引物，进行PCR扩增，得到产物mGSK2C；/n4)将上述产物mGSK2N和mGSK2C混合作为模板，采用引物GSK2FL-F和GSK2FL-R进行PCR扩增，得到扩增产物mGSK2，即包含了定点突变的GSK2编码DNA；/n5)以扩增产物mGSK2为模板，GSK2FL-inF和GSK2FL-inR为引物，进行PCR扩增，得到PCR扩增产物；/n6)用BamHI酶切pCAMBIA1300-35S-Flag载体，回收10kb的载体骨架；将上述步骤5)的PCR扩增产物和载体骨架通过同源重组法进行连接，得到重组载体pCAMBIA1300-35S-Flag-mGSK2；/n7)将重组载体pCAMBIA1300-35S-Flag-mGSK2通过农杆菌介导法导入水稻中，获得具有多籽粒簇生性状的转基因水稻植株；/n其中，所述引物如下：/nGSK2FL-F:5’-AAGCTTTGTGCAGTGCCATT-3’/nGSK2FL-R:5’-TTAGCTCCCAGTATTGAAG-3’/nGSK2-2m-F：5’-ACACCAATCCGTGAGGAAATACGTTGCATG-3’/nGSK2-2m-R：5’-CATGCAACGTATTTCCTCACGGATTGGTGT-3’/nGSK2FL-inF:5’-CG AAATCGATGGATCCGATGGACCAGCCGGCGCC-3’；/nGSK2FL-inR:5’-AGGCTACGTAGGATCCTTAGCTCCCAGTATTGAAGAAG-3’。/n
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