[发明专利]从犬的脐带制备间充质干细胞的方法

摘要

本发明涉及从犬的脐带制备间充质干细胞的方法。具体的，所述方法包括以下步骤：消毒和清洗、消化处理、细胞培养、细胞传代、细胞冻存。本发明从犬脐带制备间充质干细胞的方法呈现优异的技术效果。所制得的间充质干细胞能够有益的治疗犬科动物的关节炎、骨折、肌肉损伤、韧带损伤、软骨损伤、关节损伤、认知功能障碍、免疫介导性疾病、干眼症、复发性葡萄膜炎、肝脏疾病、心脏病、肾脏疾病、糖尿病、胃肠道疾病、甲状腺疾病、皮肤病。

主权项

1.从犬的脐带制备间充质干细胞的方法，该方法包括以下步骤：(1)消毒和清洗：用消毒液对犬的脐带组织(例如，新鲜离体组织)表面进行消毒，将脐带剪开，平铺，通过缓冲液清洗脐带组织，以减少脐带组织上的红细胞；(2)消化处理：将步骤(1)得到的脐带组织剪成组织块，将组织块放入消化酶溶液中，消化处理0.5‑3小时，过滤清除组织块后，加入间充质干细胞培养基以终止消化，然后对消化得到的细胞进行细胞清洗，最终获得细胞悬液；(3)细胞培养：将步骤(2)得到的细胞悬液放入培养容器，再将培养容器放进培养箱中进行培养，培养至第2‑7天时将培养容器从培养箱中取出，补加适量间充质干细胞培养基，继续培养；在第8‑11天时将培养容器从培养箱中取出，进行第一次全换液，继续培养；往后每1‑3天进行一次全换液；(4)细胞传代：当培养容器中的贴壁细胞融合率达到40％‑70％以后，利用消化酶将贴壁细胞脱离容器底部，离心，抽走上清液，加入充质干细胞培养基重新悬浮细胞，再接种于培养容器进行培养，此后每1‑3天换液一次，直至融合率达到70‑90％后，即得P1代脐带间充质干细胞；接着照上述培养方法进行必要的传代；任选的(5)冻存：将步骤(4)所得脐带间充质干细胞中添加细胞冻存液于液氮中冷冻，备用。