[发明专利]一种利用流式细胞分选筛选纳米抗体的方法在审
| 申请号： | 201810143471.6 | 申请日： | 2018-02-12 |
| 公开（公告）号： | CN108315342A | 公开（公告）日： | 2018-07-24 |
| 发明（设计）人： | 宋海鹏;刘原源;于建立;周宇杭;李飞;古一 | 申请（专利权）人： | 深圳市国创纳米抗体技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C07K16/12;C12N15/13;G01N15/14 |
| 代理公司： | 北京市众天律师事务所 11478 | 代理人： | 李新军 |
| 地址： | 518057 广东省深圳市南山区粤*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种利用流式细胞分选筛选纳米抗体的方法，所述方法步骤包括：(1)收集被免疫靶抗原的骆驼科动物的外周血B淋巴细胞；(2)应用靶抗原通过流式细胞术分选所述B淋巴细胞为单细胞；(3)将分选好的单个B淋巴细胞直接进行逆转录反应生成cDNA；(4)以cDNA为模板，PCR扩增抗体重链序列并回收扩增产物；(5)以步骤(4)扩增产物为模板，PCR扩增抗体的CH1与CH2序列编码基因；(6)以步骤(5)扩增为阴性的步骤(4)扩增产物为模板，PCR扩增抗体的VHH片段编码基因；(7)将步骤(6)获得的VHH片段克隆入表达载体，并在宿主菌中表达所述VHH片段；(8)鉴定步骤(7)表达的纳米抗体。本发明公开的方法操作简单、筛选周期短，既避免了噬菌体污染的风险，又提高了筛选效率，大大较少了工作量，经济成本低，适合于工业化的大批量筛选要求。 | ||
| 搜索关键词： | 筛选 扩增产物 纳米抗体 流式细胞分选 靶抗原 分选 抗体 流式细胞术 骆驼科动物 逆转录反应 噬菌体污染 表达载体 经济成本 抗体重链 片段编码 片段克隆 序列编码 宿主菌 外周血 基因 扩增 阴性 工作量 回收 应用 | ||
【主权项】：
1.一种利用流式细胞分选筛选纳米抗体的方法，所述方法步骤包括：(1)收集被免疫靶抗原的骆驼科动物的外周血B淋巴细胞；(2)应用靶抗原通过流式细胞术分选所述B淋巴细胞为单细胞；(3)将分选好的单个B淋巴细胞直接进行逆转录反应生成cDNA；(4)以cDNA为模板，PCR扩增抗体重链序列并回收扩增产物；(5)以步骤(4)扩增产物为模板，PCR扩增抗体的CH1与CH2序列编码基因；(6)以步骤(5)扩增为阴性的步骤(4)扩增产物为模板，PCR扩增抗体的VHH片段编码基因；(7)将步骤(6)获得的VHH片段克隆入表达载体，并在宿主菌中表达所述VHH片段；(8)鉴定步骤(7)表达的纳米抗体。
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