[发明专利]一种骨材料脱细胞的方法及制备脱细胞骨粉的方法在审
| 申请号： | 201810140944.7 | 申请日： | 2018-02-11 |
| 公开（公告）号： | CN108324990A | 公开（公告）日： | 2018-07-27 |
| 发明（设计）人： | 李花琼;王莹莹;潘琼希;赵子建 | 申请（专利权）人： | 温州优墨生物科技有限公司 |
| 主分类号： | A61L27/36 | 分类号： | A61L27/36 |
| 代理公司： | 温州金瓯专利事务所(普通合伙) 33237 | 代理人： | 夏曙光 |
| 地址： | 325000 浙江省温州市高新技术产业开发*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明属于组织修复及其再生的生物领域，具体涉及一种骨材料脱细胞的方法及制备脱细胞骨粉的方法。依次经过Tris‑Hcl溶液孵化、胰蛋白酶溶液作用、含有十二烷基硫酸钠的Tris‑Hcl溶液孵化、含有乙二胺四乙酸及蛋白酶抑制剂的PBS缓冲液清洗、含有十二烷基硫酸钠的Tris‑Hcl溶液孵化、酶解、PBS缓冲液清洗。通过本发明的脱细胞方法对骨材料进行脱细胞处理后，DNA几乎没有残留，而胶原纤维可以获得保留，这样的脱细胞骨材料保留了天然材料的细胞外基质，具有良好的细胞外微环境，生物相容性好。猪骨在解剖、生理、代谢和生物活性分子上都和人有极大的相似处，更适合作为骨组织工程材料。 | ||
| 搜索关键词： | 脱细胞 十二烷基硫酸钠 孵化 骨粉 种骨 制备 清洗 骨组织工程材料 蛋白酶抑制剂 生物活性分子 胰蛋白酶溶液 乙二胺四乙酸 生物相容性 脱细胞处理 细胞外基质 胶原纤维 生物领域 天然材料 脱细胞骨 组织修复 微环境 保留 对骨 酶解 猪骨 代谢 解剖 残留 细胞 再生 | ||
【主权项】：
1.一种骨材料脱细胞的方法，其特征在于，具体包括以下步骤：（1）将骨粉放入Tris‑Hcl溶液中孵化20‑30h， 40‑50℃；（2）在浓度为0.2‑0.3%的胰蛋白酶溶液中，恒温35‑40℃，作用20‑30小时；（3）在含有十二烷基硫酸钠的Tris‑Hcl溶液中，恒温40‑50℃，孵化20‑30小时；（4）在含有乙二胺四乙酸的PBS缓冲液中，加入蛋白酶抑制剂清洗；（5）在含有十二烷基硫酸钠的Tris‑Hcl溶液中，恒温40‑50℃，孵化20‑30小时；（6）在浓度为30‑70mM的Tris‑Hcl ph7.3‑7.7溶液中，加入氯化镁、牛血清白蛋白、DNA酶和RNA酶，恒温35‑40℃，作用2‑4小时；（7）在含有乙二胺四乙酸的PBS缓冲液中，加入蛋白酶抑制剂清洗；（8）用含有过氧乙酸的PBS缓冲液中，室温清洗2‑4小时；（9）PBS缓冲液清洗。
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