[发明专利]基于CRISPR-Cas9技术提高B16F10细胞转染效率的方法在审
| 申请号： | 201810137912.1 | 申请日： | 2018-02-10 |
| 公开（公告）号： | CN108559745A | 公开（公告）日： | 2018-09-21 |
| 发明（设计）人： | 杨佳丽;杨兴林;潘讴东 | 申请（专利权）人： | 和元生物技术（上海）股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/113 | 分类号： | C12N15/113;C12N15/867;C12N5/10 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 201321 上海市浦东*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明公开了基于CRISPR‑Cas9技术提高B16F10细胞转染效率的方法。本发明首先获得特异性靶向SQSTM1基因第二外显子的sgRNA序列；其次构建SQSTM1基因的sgRNA到慢病毒载体系统，该载体表达Cas9蛋白；最后将含有该sgRNA的CRISPR/Cas9慢病毒载体转染B16F10细胞，药筛后获得SQSTM1的敲除细胞株。转染GFP质粒实验发现，所获得的SQSTM1的B16F10敲除细胞株具有转染效率明显高于未敲除细胞的优势。本发明具有操作步骤简单、sgRNA靶向性好，且对SQSTM1基因切割效率高；并能明显提高B16F10细胞的转染效率，为基础研究提供更好的细胞工具。 | ||
| 搜索关键词： | 敲除 细胞 细胞转染 转染效率 细胞株 转染 基因 慢病毒载体系统 慢病毒载体 特异性靶向 基础研究 切割效率 载体表达 靶向性 外显子 构建 药筛 质粒 蛋白 发现 | ||
【主权项】：
1.基于CRISPR‑Cas9提高B16F10细胞转染效率的方法，其特征在于，首先设计获得特异性靶向SQSTM1基因第二外显子的sgRNA；其次构建SQSTM1基因的sgRNA到慢病毒载体；然后将此慢病毒载体转染B16F10细胞，药筛后得到SQSTM1基因敲除细胞株。
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