[发明专利]一种用紧穗野生稻幼胚繁育再生植株的方法

摘要

本发明涉及一种用紧穗野生稻幼胚繁育再生植株的方法，属植物组织培养技术领域。该方法包括：外植体的选择，外植体灭菌，愈伤组织的诱导和增殖培养，愈伤组织分化培养，分化苗的生根培养、炼苗、移栽步骤。本发明运用不同植物激素组合和培养条件的组合，成功诱导出紧穗野生稻愈伤组织，再将愈伤组织转移到增殖培养基上进行增殖培养，提高愈伤质量和数量。本发明的优点在于：能够高效地获得紧穗野生稻再生植株，繁殖速度快、周期短，解决了紧穗野生稻资源不足的问题，为保护濒危的野生稻资源具有非常重要的意义。

主权项

1.一种用紧穗野生稻幼胚繁育再生植株的方法,其特征在于该方法的具体步骤如下：a.外植体无菌处理：将未成熟幼胚用体积百分比为75％的酒精表面灭菌30秒，再用体积百分比为10％的次氯酸钠，进行灭菌处理15分钟，期间不断摇匀，倒掉次氯酸钠,用无菌水洗6遍，将清洗好的幼胚取出用无菌吸水纸吸干；b.愈伤诱导培养：将清洗好的幼胚转接到愈伤组织诱导培养基上，置于人工气候箱28℃暗培养30天，长出透明粘性细胞团，继续培养10‑15天，透明粘性细胞团长至0.2cm时进行愈伤继代培养；愈伤诱导培养基为：N6基本培养基+2,4‑D 5.0mg/L+植物凝胶2.8g/L+蔗糖30％,PH6.0；c.愈伤组织继代：将带有粘液的愈伤组织从种子上分离下来，接入愈伤继代培养基中，置于人工气候箱中28℃暗培养，每20天继代一次，继代2‑3次后透明粘性细胞团变成白色愈伤组织，并长至0.2‑0.5cm时进行增值培养；愈伤继代培养基为：N6基本培养基+2,4‑D 3.0‑4.0mg/L+植物凝胶2.8g/L+蔗糖30％,PH6.0；d.愈伤增殖培养：将白色愈伤组织接入装有继代培养基的100ml三角瓶中，每瓶20个愈伤组织，置于人工气候箱中28℃暗培养，每7天更换一次培养基，15‑20天愈伤组织长至直径为1.0‑2.0cm的淡黄色、膨松颗粒状愈伤后进行分化培养；e.分化培养：将膨松颗粒状的愈伤组织接入装有预分化培养基的100ml三角瓶中，每瓶10‑15个，置于温度为28℃，培养箱中暗培养1天，移至温度为28℃，光照为4000lx的培养箱中继续培养10天，愈伤组织出现绿色点，将愈伤组织转入分化培养基中于温度为28℃，光照为4000lx的培养箱中继续培养20‑25天，愈伤分化出小苗，待小苗长至2‑4cm长时，转入生根培养基进行生根；预分化培养基为：N6基本培养基+6‑BA 6mg/L+NAA 0.5mg/L+KT 2mg/L+ZT 2mg/L+植物凝胶2.8g/L+蔗糖30％,PH6.0；分化培养基：N6基本培养基+6‑BA 4mg/L+NAA 0.3mg/L+KT 2mg/L+ZT 2mg/L+植物凝胶2.8g/L+蔗糖30％,PH6.0；f.生根培养：将小苗接入装有生根培养基的直径5cm、长20cm的试管中，没根试管2‑3株，置于28℃，2000lx的光照培养箱中进行生根培养，每10天更换一次培养基，20‑30天后，根长至5‑8cm，苗长至10‑12cm后进行炼苗；生根培养基为：N6基本培养基+NAA 0.3g/L+活性炭0.3％+植物凝胶2.8g/L+蔗糖15％,PH6.0；h.炼苗：将苗从试管中取出，用28℃自来水将苗根部的培养基冲洗干净，放入直径5cm、长20cm的试管中，加水淹没根部，管口敞开，置于28℃，2000lx的光照培养箱中，5天后，将苗从光照培养箱中移出，栽到购于市场的营养基质中，置于温室进行常规培养，直至叶片展开、新根长出，移入大的花盆中，常规培养直至种子成熟。