[发明专利]用于体外糖工程化抗体的方法

摘要

本文报道了酶促产生在Fc区中具有修饰的糖基化的抗体的方法，其包括以下步骤：将抗体亲和配体结合的在Fc区具有糖基化的单克隆抗体与第一酶孵育足够的时间，并且在适于修饰Fc区的糖基化的条件下孵育，从抗体轻链亲和配体中回收抗体，将回收的抗体在溶液中与第二酶孵育足够的时间，并且在适于将Fc区的糖基化修饰为确定形式的条件下孵育，在阳离子交换色谱法中从第二酶分离在Fc区具有修饰的糖基化的抗体，从而产生在Fc区具有修饰的糖基化的抗体。

主权项

1.一种酶促产生在N‑糖基化位点上具有修饰的糖基化的抗体的方法，其包括：a)将抗体(轻链或Fc区)亲和配体结合的在N‑糖基化位点具有糖基化的单克隆抗体与第一酶(和第一活化的糖残基)孵育足够的时间，并且在适于修饰N‑糖基化位点的糖基化的条件下孵育，b)任选地回收第一酶，由此产生再循环的第一酶，c)从抗体(轻链或Fc区)亲和配体中回收抗体，d)将回收的抗体在溶液中与第二酶(和第二活化的糖残基)孵育足够的时间，并且在适于修饰抗体的N‑糖基化位点的糖基化(为确定的形式)的条件下孵育，e)在阳离子交换色谱法中从第二酶分离在N‑糖基化位点具有修饰的糖基化的抗体，从而产生在N‑糖基化位点具有修饰的糖基化的抗体和任选的再循环的第二酶，和f)任选地用步骤b)的第一再循环酶重复步骤a)至少一次，并用步骤e)的第二再循环酶重复步骤d)至少一次。