[发明专利]基于激光诱导荧光与液相色谱联用的真菌毒素检测方法

摘要

本发明公开了一种基于激光诱导荧光与液相色谱联用的真菌毒素检测方法，其通过在高效液相色谱的色谱柱后连接激光诱导荧光检测器，构成激光诱导荧光与液相联用的真菌毒素的检测装置，并采用所述检测装置测定试样中真菌毒素的色谱峰面积，根据真菌毒素的标准曲线换算得到试样中真菌毒素的含量。本发明便捷、灵敏、准确，适用于粮油食品与饲料中黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素含量的测定，满足生产过程监控、现场检测和快速筛查需要。 1

主权项

1.基于激光诱导荧光与液相色谱联用的真菌毒素检测方法，其特征在于，其通过在高效液相色谱的色谱柱后连接激光诱导荧光检测器，构成激光诱导荧光与液相联用的真菌毒素的检测装置，并采用所述检测装置测定试样中真菌毒素的色谱峰面积，根据真菌毒素的标准曲线换算得到试样中真菌毒素的含量。

2.如权利要求1所述的基于激光诱导荧光与液相色谱联用的真菌毒素检测方法，其特征在于，其包括以下步骤：

步骤一、制备待检测样品；

步骤二、用稀释剂制备一系列的不同浓度的真菌毒素的标准溶液，采用所述检测装置依次对一系列真菌毒素的标准溶液进行检测，记录一系列标准溶液对于的色谱峰面积值，建立真菌毒素的浓度与色谱峰面积的关系方程式；

步骤三、将步骤一得到的样品用稀释剂溶解制得待检测供试品，采用所述检测装置对所述待检测供试品进行检测，记录所述待检测供试品对应的色谱峰面积值，将该色谱峰面积值带入步骤二中得到的关系方程式中，解出样品中真菌毒素的含量。

3.如权利要求2所述的基于激光诱导荧光与液相色谱联用的真菌毒素检测方法，其特征在于，步骤一中待检测样品的制备方法具体为：

S1、取5～25g的待检测试样粉碎后与2～10g的氯化钠和20～100mL的提取剂混匀，然后经滤纸过滤后收集滤液，取10～30mL的滤液加入40～80mL的水稀释，并用玻璃纤维纸过滤，得样品提取液；其中，所述提取剂为体积浓度为40～90％的甲醇水溶液或体积浓度为40～90％的乙腈水溶液；

S2、将免疫亲和柱连接于50.0mL注射器下方，移取10～30mL的步骤S1得到的样品提取液注入注射器中，调节注射器内部的压力使得样品提取液以2～10mL/min流速通过免疫亲和柱，直至2～3mL的空气通过免疫亲和柱，然后用5～20mL的去离子水淋洗免疫亲和柱两次，并使2～3mL的空气通过免疫亲和柱后用1～5mL色谱级甲醇洗脱，控制甲醇的流速为1～5mL/min，收集全部洗脱液，将洗脱液用真空泵抽干，即得。

4.如权利要求3所述的基于激光诱导荧光与液相色谱联用的真菌毒素检测方法，其特征在于，真菌毒素为黄曲霉毒素、赭曲霉毒素或玉米赤霉烯酮。

5.如权利要求4所述的基于激光诱导荧光与液相色谱联用的真菌毒素检测方法，其特征在于，黄曲霉毒素对应的所述稀释剂为体积浓度为45％的甲醇水溶液；赭曲霉毒素对应的所述稀释剂为体积比为96:102:2的乙腈、水和冰醋酸的混合溶液；玉米赤霉烯酮对应的所述稀释剂为体积比为46:46:8的乙腈、水和甲醇的混合溶液。

6.如权利要求5所述的基于激光诱导荧光与液相色谱联用的真菌毒素检测方法，其特征在于，所述检测装置中激光诱导荧光检测器的激发波长为260～410nm，发射波长450～510nm。

7.如权利要求6所述的基于激光诱导荧光与液相色谱联用的真菌毒素检测方法，其特征在于，一系列的黄曲霉毒素的标准溶液的浓度分别为0.5ng/mL、1.0ng/mL、5.0ng/mL、10.0ng/mL和20.0ng/mL；

一系列的赭曲霉毒素的标准溶液的浓度分别为1.0ng/mL、2.5ng/mL、5.0ng/mL、10.0ng/mL和50.0ng/mL；

一系列的玉米赤霉烯酮的标准溶液的浓度分别为10ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL和500ng/mL。

8.如权利要求7所述的基于激光诱导荧光与液相色谱联用的真菌毒素检测方法，其特征在于，所述试样为食品或饲料。