[发明专利]基于激光诱导荧光与液相色谱联用的真菌毒素检测方法

说明书

本发明公开了一种基于激光诱导荧光与液相色谱联用的真菌毒素检测方法，其通过在高效液相色谱的色谱柱后连接激光诱导荧光检测器，构成激光诱导荧光与液相联用的真菌毒素的检测装置，并采用所述检测装置测定试样中真菌毒素的色谱峰面积，根据真菌毒素的标准曲线换算得到试样中真菌毒素的含量。本发明便捷、灵敏、准确，适用于粮油食品与饲料中黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素含量的测定，满足生产过程监控、现场检测和快速筛查需要。

技术领域

本发明涉及真菌毒素检测技术领域。更具体地说，本发明涉及一种基于激光诱导荧光与液相色谱联用的真菌毒素检测方法。

背景技术

真菌毒素是真菌生长繁殖过程中产生的次级代谢物，主要污染粮食及油料作物，造成产品品质下降和严重的经济损失。目前粮油作物及以此为原料加工的食品和饲料中普遍存在的外源性污染毒素主要有黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素等。特别在饲料中，真菌毒素的污染还相当严重。由于真菌毒素具有性质稳定、熔点高、可溶性小、毒性强等特点，粮油原料一旦被污染，利用常规的加工技术很难去除，残留在粮油食品和饲料中的毒素，最终通过食物链传递严重危及食品安全。真菌毒素污染已成为危害食品安全的主要因素之一。

目前真菌毒素检测方法主要包括免疫分析法、色谱分析法和光谱分析法等。免疫检测方法虽然能实现对主要真菌毒素的快速测定，但是在检测结果的重现性、稳定性和准确性上存在不足。薄层层析法经济实用，但精确度低。色谱检测方法虽然准确、可靠，但是设备昂贵、检测成本高、不能满足大量样品快速检测的要求。荧光光度法常结合免疫亲和净化，能够定性或定量分析真菌毒素，具有方便、快捷、灵敏度高的特点，是AOAC国际组织和我国出入境检验检疫行业通常使用的标准检测方法。激光诱导荧光光谱分析法具有选择性强、样品用量少、方法简便、检测速度快、可实现现场检测等优点，是目前灵敏度最高的检测技术之一。

发明内容

本发明的一个目的是解决至少上述问题，并提供至少后面将说明的优点。

本发明还有一个目的是提供一种基于激光诱导荧光与液相色谱联用的真菌毒素检测方法，该方法便捷、灵敏、准确，适用于粮油食品与饲料中黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素含量的测定，满足生产过程监控、现场检测和快速筛查需要。

为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，提供了一种基于激光诱导荧光与液相色谱联用的真菌毒素检测方法，其通过在高效液相色谱的色谱柱后连接激光诱导荧光检测器，构成激光诱导荧光与液相联用的真菌毒素的检测装置，并采用所述检测装置测定试样中真菌毒素的色谱峰面积，根据真菌毒素的标准曲线换算得到试样中真菌毒素的含量。

优选的是，所述的基于激光诱导荧光与液相色谱联用的真菌毒素检测方法，其包括以下步骤：

步骤一、制备待检测样品；

步骤二、用稀释剂制备一系列的不同浓度的真菌毒素的标准溶液，采用所述检测装置依次对一系列真菌毒素的标准溶液进行检测，记录一系列标准溶液对于的色谱峰面积值，建立真菌毒素的浓度与色谱峰面积的关系方程式；

步骤三、将步骤一得到的样品用稀释剂溶解制得待检测供试品，采用所述检测装置对所述待检测供试品进行检测，记录所述待检测供试品对应的色谱峰面积值，将该色谱峰面积值带入步骤二中得到的关系方程式中，解出样品中真菌毒素的含量。

优选的是，所述的基于激光诱导荧光与液相色谱联用的真菌毒素检测方法，步骤一中待检测样品的制备方法具体为：

S1、取5～25g的待检测试样粉碎后与2～10g的氯化钠和20～100mL的提取剂混匀，然后经滤纸过滤后收集滤液，取10～30mL的滤液加入40～80mL的水稀释，并用玻璃纤维纸过滤，得样品提取液；其中，所述提取剂为体积浓度为40～90％的甲醇水溶液或体积浓度为40～90％的乙腈水溶液；