[发明专利]沙棘GPD1基因的构建方法有效
| 申请号： | 201711423900.7 | 申请日： | 2017-12-25 |
| 公开（公告）号： | CN108165566B | 公开（公告）日： | 2021-05-04 |
| 发明（设计）人： | 丁健;阮成江;李景滨;杜维;关莹 | 申请（专利权）人： | 大连民族大学 |
| 主分类号： | C12N15/53 | 分类号： | C12N15/53;C12N15/84;A01H5/00;A01H6/82 |
| 代理公司： | 大连智高专利事务所(特殊普通合伙) 21235 | 代理人： | 胡景波 |
| 地址： | 116600 辽宁省*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | 本发明涉及沙棘GPD1基因的构建方法，属于生物工程技术领域。该基因的构建和鉴定方法如下：(1)提取沙棘果肉RNA，并获得GPD1基因cDNA；(2)构建沙棘GPD1基因过表达载体；(3)利用沙棘GPD1基因过表达载体转化农杆菌；(4)利用pBI121‑T‑GPD1重组表达载体转化烟草；(5)转化烟草的分子检测；(6)测定烟草叶片含油率。本发明首次从沙棘果肉中分离获得GPD1基因，并通过构建过表达载体及农杆菌介导法成功转化烟草，使烟草叶片油脂含量提高28％。为沙棘果肉以及植物非种子组织油脂合成积累机制研究提供技术依据。 | ||
| 搜索关键词： | 沙棘 gpd1 基因 构建 方法 | ||
【主权项】：
1.沙棘GPD1基因的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)提取沙棘果肉RNA，并获得GPD1基因cDNA；
(2)构建沙棘GPD1基因过表达载体；
(3)利用沙棘GPD1基因过表达载体转化农杆菌；
(4)利用pBI121‑T‑GPD1重组表达载体转化烟草；
(5)转化烟草的分子检测；
(6)测定烟草叶片含油率。
2.如权利要求1所述的沙棘GPD1基因的构建方法，其特征在于，步骤(3)：农杆菌感受态细胞制备过程中，采用含有100mg/L链霉素和100mg/L利福平的发根农杆菌培养基；在冻融法转化农杆菌过程中，采用含有100mg/L链霉素、100mg/L利福平和50mg/L卡那霉素的发根农杆菌培养基。3.如权利要求1所述的沙棘GPD1基因的构建方法，其特征在于，步骤(4)转化烟草过程中使用的MS预培养固体培养基组成为：4.74g/LMS培养基粉末、30g/L蔗糖、8g/L琼脂粉、0.5mg/L6‑苄氨基腺嘌呤、0.1mg/Lα‑萘乙酸，pH6.0。4.如权利要求1所述的沙棘GPD1基因的构建方法，其特征在于，步骤(4)转化烟草过程中使用的分化培养基组成为：4.74g/LMS培养基粉末、30g/L蔗糖、8g/L琼脂粉、0.5mg/L6‑苄氨基腺嘌呤、0.1mg/Lα‑萘乙酸、50mg/L卡那霉素、500mg/L羧苄青霉素，pH6.0。
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