[发明专利]免疫球蛋白GN-糖基的分析方法

摘要

本发明提供一种免疫球蛋白G N‑糖基高通量定量、定性分析技术。该技术利用亲水色谱技术提取免疫球蛋白G，利用96孔板对免疫球蛋白糖基进行酶切、标记，利用超高压液相色谱仪对糖基进行检测，利用R软件对糖基数据进行预处理，利用数据库对糖基结构进行鉴定，最终实现糖基的高通量检测以及糖基数据的定量、定性处理。该方法可应用于抗体糖基检测以及生物标志物筛选，并为将来的研究方向提供参考或指引作用。

主权项

1.一种免疫球蛋白的N-糖基结构的高通量测定的方法，步骤包括：(1)血浆免疫球蛋白G提取：从血浆中通过真空提取装置提取和纯化免疫球蛋白IgG；(2)N-糖基切除：通过肽N糖苷酶F(PNGase)对N-糖基进行特异性切除；(3)N-糖基荧光标记：利用2-氨基苯甲酰胺(2-AB)对切除的N-糖基进行荧光标记；(4)UPLC糖基检测：设置UPLC糖基检测流动相以及糖链检测条件，对溶解的样本进行检测，并汇总所检测样本的色谱峰进行积分判峰，并保存每个峰的保留时间、峰面积、峰面积百分比、峰高度；(5)糖基峰结构鉴定数据预处理：将原始采集的峰面积转化为糖基百分含量，并对所得N-糖数据进行批次效应校正，同时筛选和剔除离群值；(6)构建待测样本的N-糖基图谱：将所得的糖基峰，利用GlycanR数据程序计算糖基衍生变量，得到待测样本的N-糖基图谱；(7)N-糖基结构鉴定：将所得待测样本的N-糖基图谱，与中国人糖基标准图谱及其相关数据库进行比较，从而确定待测样本的免疫球蛋白的N-糖基结构。