[发明专利]一种分离纯化烟草中赖百当二萜类成分的方法

摘要

本发明属于分离纯化技术领域，具体涉及烟草中一类二萜类相关物质的提取、分离和纯化。该方法包括烟叶浸提、正相硅胶柱色谱分离、高效液相色谱分离等步骤。由于赖百当二萜类物质（包括Z‑abienol和13(E)‑labd‑13‑ene‑8α,15‑diol）主要存在于烟叶表面腺毛分泌物中，因而本申请中提取原料必须为新鲜烟叶才能确保较好提取效果。初步检测结果表明，利用本申请所述提取分离方法所制备赖百当二萜类物质的纯度大于98%，完全可以作为标准品用于相关物质分析研究中，同时由于相关分离纯化产品回收率较高，工艺操作较为成熟、简便，因而具有较好的推广应用价值，同时也可为烟草品质改善奠定良好的方法学基础。

主权项

1.一种分离纯化烟草中赖百当二萜类成分的方法，其特征在于，该方法具体包括如下步骤：（1） 烟叶浸提：以成熟期新鲜烟叶作为提取原料，将其干燥后粉碎，用有机溶剂进行浸提，过滤、回收浸提液，将浸提液减压浓缩至膏状，称为烟草浸膏L1；（2）正相硅胶柱色谱分离：采用正相硅胶色谱柱对步骤（1）中所得烟草浸膏L1进行柱层析分离，所得洗脱流份即为赖百当二萜类物质；所述赖百当二萜类物质包括Z-abienol和13(E)-labd-13-ene-8α,15-diol；相关柱层析及洗脱步骤具体如下：将烟草浸膏L1用石油醚溶解，拌以硅胶，干法上样；以石油醚和丙酮作为梯度洗脱剂，对步骤（2.1）中上样后样品进行梯度洗脱，收集洗脱流出液，将此洗脱流出液减压浓缩，得到中间物L2；将步骤（2.2）所得中间物L2用正己烷溶解，湿法装柱；以正己烷和乙酸乙酯作为梯度洗脱剂，对步骤（2.3）中装柱后中间物L2进行梯度洗脱，收集洗脱流出液，将此洗脱流出液减压浓缩，得到中间物L3和中间物L4；（3）利用高效液相色谱进行分离：采用反相色谱C18色谱柱，以甲醇和水的混合体系为洗脱溶液，对步骤（2.4）中检测所确认的中间物L3、中间物L4进行等度洗脱；对中间物L3进行等度洗脱时，洗脱溶液以体积比计，甲醇：水=9:1，收集31.9min处吸收峰对应的洗脱液，记为洗脱液L5，此即为含有化合物Z-abienol的溶液；对中间物L4进行等度洗脱时，洗脱溶液以体积比计，甲醇：水=85:15，收集25.9min处吸收峰对应的洗脱液，记为洗脱液L6，此即为含有化合物13(E)-labd-13-ene-8α,15-diol的溶液。