[发明专利]饲料中二氢吡啶的气相色谱质谱联用检测方法

摘要

一种饲料中二氢吡啶的气相色谱质谱联用检测方法，包括下列步骤：整个前处理过程应尽可能避免光照，采用棕色器皿，避光操作；或在暗室中进行；称取适量待测样品并加入紫外线吸收剂；用乙腈做溶剂，利用超声萃取与振荡结合的方式萃取；采用氯化钠、氯化钾等无机盐除去萃取液中的水，并冷冻离心，旋转蒸发浓缩形成浓缩液；浓缩液经固相微萃取净化；净化液经N,O‑双(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺衍生；气相色谱质谱联用(GCMS)测定。本发明提出一种使用常规气相色谱质谱联用仪准确地定性、定量检测饲料产品中二氢吡啶的方法。

主权项

1.一种饲料中二氢吡啶的气相色谱质谱联用检测方法，其特征在于，包括下列步骤：

(1)整个前处理过程应尽可能避免光照，采用棕色器皿，避光操作；或在暗室中进行；

(2)称取适量待测样品并加入紫外线吸收剂；

(3)用乙腈做溶剂，利用超声萃取与振荡结合的方式萃取；

(4)采用氯化钠或氯化钾除去萃取液中的水，并冷冻离心，旋转蒸发浓缩形成浓缩液；

(5)浓缩液经固相微萃取净化；

(6)净化液经N,O‑双(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺衍生；

(7)气相色谱质谱联用(GCMS)测定。

2.如权利要求1所述的饲料中二氢砒啶的检测方法，其特征在于，紫外线吸收剂添加总量为样品量的5％～20％；紫外线吸收剂由能覆盖吸收UVA与UVB的一种或几种吸收剂复配而成，可选用4‑甲基苄亚基樟脑、丁基甲氧基二苯甲酰基甲烷、苯基苯并咪唑磺酸、对氨基苯甲酸、甲氧基肉桂酸乙基己酯、对甲氧基肉桂酸异戊酯；紫外线吸收剂可添加抗氧化剂，抗氧化剂可选用抗坏血酸、2,6‑二叔丁基‑4‑甲基苯酚、丁基羟基茴香醚、叔丁基对苯二酚。

3.如权利要求1所述的饲料中二氢砒啶的检测方法，其特征在于，所述超声萃取法对样品进行常温萃取，时间为5～30min，5～10min最优；超声后用振荡器振荡3～5min，振荡频率50～60HZ；加入1～2g无机盐并剧烈振荡，使萃取液中溶剂与水分分离；无机盐可选用氯化钠、氯化钾、磷酸二氢铵，最优选氯化钠；采用冷冻离心机对振荡后的样品进行分离纯化，设定转速3000～5000r/min，温度0～25℃，离心3～10min，移取上清液；采用旋转蒸发仪对上清液进行减压蒸馏，形成浓缩液，再利用无水硫酸钠进行干燥除水；减压蒸馏压力设为110～130pa，水浴温度设为30～40℃；浓缩液用乙腈定容，采用添加PSA(N‑丙基乙二胺)、无水硫酸镁、C18固相微萃取粉末对定容液进行净化处理，高速振荡1～3min，涡旋后冷冻离心转速3000～5000r/min，温度0～25℃，离心3～10min；取上清液，形成净化液。

4.如权利要求1所述的饲料中二氢砒啶的检测方法，其特征在于，利用N,O‑双(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺对净化液中二氢吡啶进行衍生，对衍生化温度设定为70～100℃，衍生时长设定为10～60min，最优条件为80℃，20min，形成待测溶液。

5.如权利要求1所述的饲料中二氢砒啶的检测方法，其特征在于，还包括配制二氢砒啶标准溶液的步骤，利用N,O‑双(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺对二氢吡啶标准溶液进行衍生，对衍生化温度设定为70～100℃，衍生时长设定为10～60min，最优条件为80℃，20min，形成二氢吡啶标准溶液。

6.如权利要求1所述的饲料中二氢砒啶的检测方法，其特征在于，采用气相色谱质谱联用仪对待测液与标准溶液中的二氢吡啶进行检测，对气相色谱质谱联用仪的进样口温度设定为220℃～280℃，载气流速设定为0.5～2.0ml/min，毛细管色谱柱选择非极性、弱极性、中极性或强极性柱，气质接口温度设定为200～300℃。

7.如权利要求1所述的饲料中二氢砒啶的检测方法，其特征在于，令经过前处理的待测溶液与标准溶液进入所述气相色谱质谱联用仪的进样口，进入所述色谱柱中进入程序升温，从40℃～120℃开始，以一个或两个速率升温至250℃～320℃，其最佳的升温程序为：60～80℃开始，保持1～2min，以5～30℃/min的速度升至200～220℃，再以5～30℃/min的速率升至250～300℃，保持2～10min，待测液的各个组分被所述毛细管色谱柱分离。

8.如权利要求1所述的饲料中二氢砒啶的检测方法，其特征在于，所述被毛细管色谱柱分离的样品各个组分通过所述气相色谱质谱仪的接口进入质谱检测部分，所述质谱检测器的离子源采用电子轰击源(EI源)，设定电压70eV，将待测组分轰击为特定离子碎片，并进行质量数分析；二氢吡啶衍生物为2,6‑二甲基吡啶‑3,5‑二甲酸二乙酯，英文名称3,5‑Diethoxycarbonyl‑2,6‑dimethylpyridine，CAS NO：1149‑24‑2，该物质的特征离子碎片m/z为：206、178、251、151、150、195。

9.如权利要求1所述的饲料中二氢砒啶的检测方法，其特征在于，采用标准溶液绘制外标法校正曲线，并进行定量分析。