[发明专利]饲料中二氢吡啶的气相色谱质谱联用检测方法

说明书

一种饲料中二氢吡啶的气相色谱质谱联用检测方法，包括下列步骤：整个前处理过程应尽可能避免光照，采用棕色器皿，避光操作；或在暗室中进行；称取适量待测样品并加入紫外线吸收剂；用乙腈做溶剂，利用超声萃取与振荡结合的方式萃取；采用氯化钠、氯化钾等无机盐除去萃取液中的水，并冷冻离心，旋转蒸发浓缩形成浓缩液；浓缩液经固相微萃取净化；净化液经N,O‑双(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺衍生；气相色谱质谱联用(GCMS)测定。本发明提出一种使用常规气相色谱质谱联用仪准确地定性、定量检测饲料产品中二氢吡啶的方法。

技术领域

本发明涉及一种二氢砒啶的检测方法，特别是一种使用气相色谱质谱联用仪对饲料中的二氢吡啶进行检测的方法。

背景技术

二氢吡啶(diludine)，化学名称2,6-二甲基-3,5-二乙酯基-1,4-二氢吡啶，英文名称3,5-Pyridinedicarboxylic acid,1,4-dihydro-2,6-dimethyl-,diethyl ester，CASNO:1149-23-1，常添加于饲料中作为抗氧化剂及畜禽促生长剂，能显著促进家畜、家禽、鱼、虾、牛羊等动物的生长，通过提高血清中甲状腺激素、促卵泡激素素、促黄体激素等重要调控生产激素的水平，改善产肉、产蛋与繁殖性能。

二氢吡啶是国家农业部首次批准在国内使用的兽药类促生长添加剂，广泛应用于牛、肉鸡的喂饲养殖过程，用量少见效快、使用方便、饲喂安全，经济效益显著。农业部《兽药质量标准》(2003)对二氢吡啶的应用范围、用法、用量、禁药期做了明确而详细的规定，然而，针对饲料等产品中该物质含量的测定，尚未有成熟的检测方法和技术规范。现有的研究主要集中于二氢吡啶作为药品的鉴定、有效成分含量标定、及其代谢物等方面，包括在动物体内的代谢路径、在体液中的残留量等，而对饲料等产品中的二氢吡啶含量检测方法尚属空白，研究科学、适用的前处理操作和仪器分析参数亟待解决。

畜禽类饲料，主要以玉米、大豆饼、米糠饼、鱼粉、肉骨粉、预混料等为主要原料，辅以各类如氨基酸、磷酸氢钙、胡萝卜素等营养成分、促生长剂、维生素等添加剂。饲料的配方设计多样、添加剂品类繁多，如此复杂的基质及各种成分间的相互作用，在检测和化学分析中带来非常严重的杂质干扰。在现有技术中，针对动物血液、尿液等基质中二氢吡啶含量多采用UV、GC-ECD、HPLC等检测技术，但应用于具有复杂成分的饲料产品时，由于这些技术本身存在分离和定性上的局限，检测中的基质干扰问题尤其凸显，严重影响目标物定性定量的准确性，给检测带来非常大的困难。

另外，二氢吡啶由于其结构上的特点，-NH-的给电子共轭效应与-COOR的吸电子共轭效应导致其结构不稳定，光稳定性较差。有试验表明，在自然光、漫射光、钨灯光等光源下，二氢吡啶均会发生不同程度的光化学反应，导致药物功效降低，限制了该药品的实际应用，药典和农业部《兽药质量标准》(2003)也提出了“避光、密闭保存”“现混现喂”的规定。同时，易光解的物质大多在遇热时也易分解。而在饲料产品整个检验过程中操作提取、净化、测定时，光照和热量是无可避免的，甚者在某些检测操作中是必须的，由此造成产品中二氢吡啶光化学反应而大量降解，导致检测数据不稳定、结果不准确、甚者误判的情况，给生产和使用者造成巨大的经济损失，并对检测方法的研究提出了巨大的挑战和考验。

发明内容

本发明要解决的技术问题在于避免现有技术的不足而提出一种使用常规气相色谱质谱联用仪准确地定性、定量检测饲料产品中二氢吡啶的方法。发明内容如下：

饲料中二氢吡啶的气相色谱质谱联用检测方法，包括下列步骤：

(1)整个前处理过程应尽可能避免光照，采用棕色器皿，避光操作；或在暗室中进行；

(2)称取适量待测样品并加入紫外线吸收剂。；

(3)用乙腈做溶剂，利用超声萃取与振荡结合的方式萃取；

(4)采用氯化钠、氯化钾等无机盐除去萃取液中的水，并冷冻离心，旋转蒸发浓缩形成浓缩液；