[发明专利]一种利用长波长别藻蓝蛋白荧光检测抗氧化能力的方法

摘要

本发明属于食品快速检测领域，公开了一种利用长波长别藻蓝蛋白荧光检测抗氧化能力的方法。本方法选用别藻蓝蛋白作为荧光指示剂，与抗氧化剂竞争由AAPH释放出的自由基，从而导致别藻蓝蛋白自身的荧光衰退时间延后，以未含有抗氧化剂的衰退曲线为空白，计算两者AUC差值，建立标准曲线并进行实际样品的检测。本发明的优点别藻蓝蛋白属于长波长荧光指示剂，其激发波长为653nm，发射波长为668nm，可以避开实际样品中自发荧光物质的干扰；具有高的pH稳定性；对内外猝灭不敏感。以上优点很大程度上提高了检测灵敏度。

主权项

一种利用长波长别藻蓝蛋白荧光检测抗氧化能力的方法，其特征在于包含以下步骤：(1)别藻蓝蛋白(APC)储备液的制备使用磷酸缓冲液将别藻蓝蛋白配置至144nM，将以上配好的溶液放置于冰箱中保存并用锡箔覆盖待用。(2)AAPH储备液的制备使用磷酸缓冲液将AAPH配置至128nM将以上配好的溶液放置于冰箱中保存并用锡箔覆盖待用。(3)Trolox储备液的制备使用无水乙醇将维生素E配置至100μM，将以上配好的溶液放置于冰箱中保存并用锡箔覆盖待用。(4)实际样品的制备使用磷酸缓冲液将实际样品进行稀释溶解，离心，取清液部分。将以上配好的溶液放置于冰箱中保存并用锡箔覆盖待用。(5)标准曲线的建立和实际样本的检测实验在96孔板酶标板中进行，依次加入适量磷酸缓冲液，APC溶液和Trolox溶液或待测样品，在37℃条件下静置15分钟，随后立即加入AAPH溶液。将酶标板立即放入多功能读板器并开始检测。每次读数之前，酶标板自动摇动。每5分钟记录一次荧光，持续2小时。所有样品和标准曲线重复进行三次独立测定。(6)数据处理导出数据并对数据进行归一化处理，将数据输出至Origin软件计算得到荧光衰减曲线下面积(AUC净)。并通过整合AUC数据得到标准曲线。利用标准曲线计算得到样品抗氧化能力的Trolox当量值。