[发明专利]一种改性修饰多壁碳纳米管分散固相萃取/UPLC-MS测定EGCG棕榈酸酯的方法

摘要

本发明涉及一种改性修饰多壁碳纳米管分散固相萃取/UPLC‑MS测定EGCG棕榈酸酯的方法，属于茶多酚的EGCG分析技术领域。本发明将Fe3O4纳米粒子键合SiO2并进行苯乙基‑C8修饰多壁碳纳米管，修饰后的多壁碳纳米管对疏水性能不同的化合物具有高度的选择性。联合UPLC‑MS同时检测了茶叶中EGCG棕榈酸酯palmitate及多种EGCG活性成分，方法操作简单、快速、准确、成本低。

主权项

一种改性修饰多壁碳纳米管分散固相萃取/UPLC‑MS测定EGCG棕榈酸酯的方法，其特征在于步骤为：一、磁性碳纳米管制备（1.1）多壁碳纳米管酸化取1g外径为10～20nm、纯度97％的多壁碳纳米管MWNTs，放入80mL浓硝酸中，60℃回流3.5h；冷却至室温，过滤，用去离子水洗涤至滤液呈中性，于60℃烘干过夜，得到酸化多壁碳纳米管AMWNTs，干燥器中保存；（1.2）改性磁性纳米粒子的制备称取54.0mg FeCl3·6H2O，19.8 mg FeCl2·4H2O，FeCl3·6H2O与FeCl2·4H2O摩尔比为2︰1，加100mL去离子水，搅拌溶解得溶液a；称取15.2mg四甲氧基硅烷，22.6mg三甲氧基 (2‑苯乙基) 硅烷，23.4mg辛基三甲氧基硅烷，加100mL含0.01% 吐温‑100、0.02%十六烷基三甲基溴化铵的10%甲醇水溶液，得溶液b；将溶液a与溶液b混合，加入0.5mL 25% NH3水溶液作催化剂，120℃搅拌回流15h；（1.3）共沉淀法制备改性磁性多壁碳纳米管在上述（1.2）反应液中加入1g酸化后的AMWNTs，用5％ NH4OH溶液调节pH，使混合液pH＞9，氮气保护下，80℃下搅拌反应30min，然后用去离子水反复洗涤直至滤液为中性，60℃过夜烘干，得到Fe3O4‑SiO2‑Phenyl ethyl‑C8／AMWNTs磁性多壁碳纳米管复合物；二、磁滞回线测定采用磁强计测量Fe3O4‑SiO2‑Phenyl ethyl‑C8／AMWNTs纳米材料的磁学性能，饱和磁化强度为4.85emu/g，具有超顺磁性，能够满足磁分离的要求；三、富集性能测定通过计算富集因子EF，比较不同吸附材料对EGCG各组分的富集性能，富集因子EF为萃取后的分析物浓度与萃取前分析物浓度的比值；计算公式为：EF＝Ca/Cb，其中Ca为萃取后的分析物浓度，Cb为萃取前分析物浓度；Fe3O4‑SiO2‑Phenyl ethyl‑C8／AMWNTs复合材料、Fe3O4纳米粒子及C18固相萃取柱三种吸附材料对9种EGCG的富集性能对比，结果显示，Fe3O4‑SiO2‑Phenyl ethyl‑C8／AMWNTs对9种EGCG的富集因子为Fe3O4的2～3.6倍，通过富集因子评价 Fe3O4‑SiO2‑Phenyl ethyl‑C8／AMWNTs对EGCG类似物具有较好的吸附性能；四、萃取条件优化（4.1）萃取时间的影响考察不同萃取时间对萃取性能的影响，看出Fe3O4‑SiO2‑Phenyl ethyl‑C8／AMWNTs对9种EGCG的吸附在10min 内达到平衡，进一步延长萃取时间，峰面积无明显变化；（4.2）解吸时间的影响为实现被吸附的目标化合物最大程度地解吸，考察了不同解吸时间对积分面积的影响，结果显示，在10～25 min时，9种EGCG的峰面积变化不大，故选择解吸时间为10min；通过对萃取及解吸条件优化，确定最佳富集条件为：涡旋震荡速度3000r/min，萃取时间10min，解吸时间10min，制备的改性修饰多壁碳纳米管Fe3O4‑SiO2‑Phenyl ethyl‑C8／AMWNTs对9种EGCG富集较好；五、样品制备将0.5g茶多酚样品用10mL去离子水溶解，取5mL样品溶液放入含10mg Fe3O4‑SiO2‑Phenyl ethyl‑C8／AMWNTs纳米材料的离心试管中，置于涡旋震荡器中以3000r／min速度振荡10min，充分萃取后，将磁铁置于离心管管壁收集磁性吸附剂，弃去液体；然后将磁性吸附剂加入100μＬ85%乙醇超声解吸15min，磁分离后取10μＬ 解吸液进行UPLC‑MS分析；六、UPLC‑MS条件柱子BEH C18 1.7µm 2.1×100mm，检测器 SQ Detctor，梯度洗脱0～10min 80/20水/甲醇～40/60水/甲醇；负扫描，0‑2000M/Z，毛细管电压 3KV，锥孔电压30V，脱溶剂气体温度400℃，源气体流速 500L/H，锥孔气体流速50 L/H，源温度100℃；七、样品测定线性范围、检出限及精密度的考察配制一系列质量浓度μｇ／Ｌ的目标物：C：0.1～10、EC：0.5～50、GC：0.2～50、EGC：0.2～20、ECG：0.5～25、CG：5～50、EGCG：0.1～25、GCG：2～100、EGCG‑p：0.5～50 的EGCG类混合标准溶液，考察Fe3O4‑SiO2‑Phenyl ethyl‑C8／AMWNTs与UPLC‑MS联用分析方法测定9种EGCG类的线性范围、相关系数和检出限。