[发明专利]一种玉米幼苗叶片及根的总RNA的提取方法

摘要

本发明公开了一种玉米幼苗叶片及根的总RNA的提取方法，经过设备的预处理、幼苗的选择、幼苗的预处理、核蛋白复合物的解离、RNA的沉淀、RNA的洗涤、RNA的溶解和存储步骤，完成了玉米幼苗叶片及根的总RNA的提取方法；本发明的优点在于简便易行、提取的RNA质量高、可同时适用于于玉米根部及叶片的RNA提取。

主权项

一种玉米幼苗叶片及根的总RNA的提取方法，其特征在于：经过设备的预处理、幼苗的选择、幼苗的预处理、核蛋白复合物的解离、RNA的沉淀、RNA的洗涤、RNA的溶解和存储步骤，完成了玉米幼苗叶片及根的总RNA的提取方法；具体步骤如下：（1）设备的预处理：用锡箔纸将研钵、研杵、无污染小勺和玻璃器进行包裹起来，然后将无RNA酶1.5ml及2ml的离心管装入烧杯中，用锡箔纸进行封口处理，将超纯水装入蓝盖玻璃试剂瓶中，无RNA酶移液枪头装入枪头盒中，然后将之前的所有设备高压灭菌，保存灭完菌的超纯水，和灭菌后的设备放于烘箱中烘干，室温保存备用；（2）幼苗的选择：选择生长到三叶期的玉米幼苗；（3）幼苗的预处理：将选择的玉米幼苗放入液氮中，同时，将灭菌后的研钵、研杵和小勺在液氮中进行预处理，将液氮中的玉米幼苗转入研钵中，加入液氮进行充分研磨，直到研磨成粉末状，然后使用小勺将粉末状幼苗装入2ml离心管中，整个操作过程在超净台中进行；（4）核蛋白复合物的解离：取1ml Trizol试剂加入到上述2ml离心管内，涡旋震荡25‑35s，然后在室温下静置一段时间，使核蛋白复合物完全解离，再加入0.1‑0.3ml的三氯甲烷，盖紧管盖，用手剧烈摇动10‑20s，然后室温下放置2‑4min；（5）RNA的沉淀：将放置后的2ml离心管在4℃环境下离心10‑20min，将离心后的上层水相转移到新的灭菌过的1.5ml离心管中，加入0.5ml的异丙醇，轻轻上下颠倒摇晃若干次，然后在室温环境下静置8‑12min，然后在4℃、12000rpm转速下离心8‑12min；（6）RNA的洗涤：将离心后的液体的上清液去除，然后加入1ml75%浓度的乙醇，涡旋混匀，进行离心处理；（7）RNA的溶解和存储：将离心后的液体中的乙醇倾倒出去，然后放置于室温下干燥8‑12min，然后加入40µL无RNA酶双蒸水，用移液器吸打10‑20次，瞬时离心，然后得到RNA，放于‑80℃环境下保存。