[发明专利]一种玉米幼苗叶片及根的总RNA的提取方法

说明书

技术领域

本发明属于一种RNA的提取方法，具体涉及一种玉米幼苗叶片及根的总RNA的提取方法。

背景技术

玉米作为C₄植物的代表，光合作用效率高，在常见农作物中单产最高，被称为谷物之王，是世界和我国播种面积第一的作物。随着我国经济的迅速发展，人民生活水平大幅提高，人们的膳食结构发生了很大变化。我国的人均年肉类消费从三十年前的25公斤提高到 50公斤，但相对于美国目前的110公斤仍有较大差距。近年来，玉米的生产和消费一直呈现快速增长的态势。尽管目前中国玉米种殖面积已经扩大到3182.5万hm²，成为仅次于美国的第二大生产国，玉米种植面积和总产量紧随美国之后。然而，近年来，中国已经从玉米出口国变成玉米进口国，从而彻底改变了世界粮食的供需情况，使国际玉米价格在短短五年内上升了六倍。与此同时，我国的耕地在减少，气候有进一步恶化的趋势；而全球人口以每年一亿人的速度爆炸式增长，能新开发的耕地极其有限，玉米供需关系很可能进一步趋紧。我国是世界盐碱地面积较大的国家之一，约为3460万hm²盐渍土面积，盐碱化耕地760万 hm²，其中海涂土壤近241万hm²，占海岸带土壤总面积的17.35％若其中一部分能种植耐盐、高产、优质的玉米，我国粮食安全势态将极大改善。盐土在中国类型多、分布广，严重影响着农业的生产发展，如何提高玉米的抗盐性，增加在盐胁迫下玉米的产量也一直是人们关注的课题。玉米耐盐构机制及相关性状是受多基因控制的数量性状，受环境影响比较大。

在玉米自交系耐盐性状的研究中需要使用到到玉米RNA的提取和转录，现有技术对玉米RNA的提取资料较少，并且，提取效果不佳，极大的影响了后期的转录，与整体对玉米自交系耐盐性状的研究。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术的不足，现提供一种提取效果佳，使用方法简单的玉米幼苗叶片及根的总RNA的提取方法。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：一种玉米幼苗叶片及根的总RNA 的提取方法，其创新点在于：经过设备的预处理、幼苗的选择、幼苗的预处理、核蛋白复合物的解离、RNA的沉淀、RNA的洗涤、RNA的溶解和存储步骤，完成了玉米幼苗叶片及根的总RNA的提取方法；具体步骤如下：

(1)设备的预处理：用锡箔纸将研钵、研杵、无污染小勺和玻璃器进行包裹起来，然后将无RNA酶1.5ml及2ml的离心管装入烧杯中，用锡箔纸进行封口处理，将超纯水装入蓝盖玻璃试剂瓶中，无RNA酶移液枪头装入枪头盒中，然后将之前的所有设备高压灭菌，保存灭完菌的超纯水，和灭菌后的设备放于烘箱中烘干，室温保存备用；

(2)幼苗的选择：选择生长到三叶期的玉米幼苗；

(3)幼苗的预处理：将选择的玉米幼苗放入液氮中，同时，将灭菌后的研钵、研杵和小勺在液氮中进行预处理，将液氮中的玉米幼苗转入研钵中，加入液氮进行充分研磨，直到研磨成粉末状，然后使用小勺将粉末状幼苗装入2ml离心管中，整个操作过程在超净台中进行； (4)核蛋白复合物的解离：取1ml Trizol试剂加入到上述2ml离心管内，涡旋震荡25-35s，然后在室温下静置一段时间，使核蛋白复合物完全解离，再加入0.1-0.3ml的三氯甲烷，盖紧管盖，用手剧烈摇动10-20s，然后室温下放置2-4min；

(5)RNA的沉淀：将放置后的2ml离心管在4℃环境下离心10-20min，将离心后的上层水相转移到新的灭菌过的1.5ml离心管中，加入0.5ml的异丙醇，轻轻上下颠倒摇晃若干次，然后在室温环境下静置8-12min，然后在4℃、12000rpm转速下离心8-12min；

(6)RNA的洗涤：将离心后的液体的上清液去除，然后加入1ml75％浓度的乙醇，涡旋混匀，进行离心处理；

(7)RNA的溶解和存储：将离心后的液体中的乙醇倾倒出去，然后放置于室温下干燥8- 12min，然后加入40μL无RNA酶双蒸水，用移液器吸打10-20次，瞬时离心，然后得到 RNA，放于-80℃环境下保存。

进一步的，所述步骤(1)中的高压灭菌的条件为：压力升至103.4kPa(1.05kg/cm²)，温度达121.3℃，维持18-20分钟。

进一步的，所述步骤(4)中的涡旋震荡后在室温下静置时间为3-7min。

进一步的，所述步骤(5)中的离心转速为10000-14000rpm，所述上下颠倒摇晃次数为8-12次。