[发明专利]两步离子交换层析法制备犬免疫球蛋白的方法在审
| 申请号： | 201711107206.4 | 申请日： | 2017-11-10 |
| 公开（公告）号： | CN109776675A | 公开（公告）日： | 2019-05-21 |
| 发明（设计）人： | 王宏伟 | 申请（专利权）人： | 北京博莱得利生物技术有限责任公司;泰州博莱得利生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C07K16/06 | 分类号： | C07K16/06;C07K1/18 |
| 代理公司： | 北京思元知识产权代理事务所(普通合伙) 11598 | 代理人： | 余光军;霍雪梅 |
| 地址： | 102206 北京市昌平区科*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种两步离子交换层析法制备犬免疫球蛋白的方法，属于犬免疫球蛋白的制备领域。本发明首先公开了一种两步离子交换层析法制备犬免疫球蛋白的方法，该方法以健康犬血清或血浆为原料，首先用阴离子交换层析进行犬免疫球蛋白的粗分离，然后用阳离子交换层析进行犬免疫球蛋白精纯化。本发明方法制备的犬免疫球蛋白的纯度和回收率均大幅提高，犬免疫球蛋白的纯度达97％以上，而且降低了产品中的内毒素含量，提高了产品的安全性。本发明方法的操作步骤简便，而且综合生产成本低于常规低温乙醇法，具有广阔的应用前景。 | ||
| 搜索关键词： | 犬免疫球蛋白 离子交换层析 制备 阳离子交换层析 阴离子交换层析 内毒素 综合生产成本 常规低温 粗分离 犬血清 乙醇法 回收率 血浆 应用 健康 | ||
【主权项】：
1.一种两步离子交换层析法制备犬免疫球蛋白的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将冷冻保存的健康犬血浆或血清在4℃融化，用醋酸盐缓冲液稀释，调pH值，过滤澄清；(2)将阴离子层析柱用醋酸盐缓冲液平衡，将过滤澄清后的血浆或血清样品上样；(3)待出现蛋白峰后，开始收集流穿液；上样结束后，用醋酸盐缓冲液继续冲洗，直至蛋白峰消失，所收集的流穿液即为犬免疫球蛋白粗品；(4)将阳离子层析柱用醋酸盐缓冲液平衡，调节步骤(3)所收集流穿液的pH，上样；(5)上样结束后，用醋酸盐缓冲液充分洗涤，直到A280吸收至基线水平，然后用含NaCl的醋酸盐缓冲液洗涤层析柱，当A280吸收回到基线水平后，用含NaCl的醋酸盐缓冲液洗脱目标蛋白，收集蛋白峰，所收集的洗脱液即为纯化后的犬免疫球蛋白；(6)将步骤(5)收集的洗脱液进行透析，然后加入麦芽糖，调节pH值；进行低pH值孵化病毒灭活，配制分装，即得。
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