[发明专利]蒙药小秦艽花指纹图谱建立方法以及质量评价方法

摘要

本发明涉及一种蒙药小秦艽花指纹图谱的建立方法，包括：1)供试品溶液的制备：取药材粉末0.4g，置150mL具塞锥形瓶中，加40％甲醇25mL，称重，超声提取，放置到室温后，再称重，用溶剂补足减失的重量，滤过，取滤液以0.45μm微孔、滤膜滤过；2)色谱条件：色谱柱：Thermo SCIENTIFIC Hypersil GOLD；流动相：乙腈(A)‑0.1％甲酸水溶液(含0.05％四氢呋喃)(B)，采用梯度洗脱95％B(0min)～95％B(5min)～90％B(10min)～87％B(30min)～80％B(50min)～78％B(60min)～75％B(65min)～65％B(90min)；流速：1.0mL/min；检测条件：DAD检测器，检测波长：245nm；柱温：25℃；进样量：20μL。本发明利用HPLC建立蒙药小秦艽花指纹图谱，提供一种较全面评价蒙药小秦艽花药材质量的方法。 1

主权项

1.一种蒙药小秦艽花指纹图谱的建立方法，包括以下步骤：

1)供试品溶液的制备：取药材粉末，精密称定，置150mL具塞锥形瓶中，精密加入0～100％甲醇25mL，称重，超声提取20～60min，放置到室温后，再称重，用溶剂补足减失的重量，滤过，取滤液以0.45μm微孔滤膜滤过，备用；

2)色谱条件：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；

流动相：选自甲醇‑水、乙腈‑水、乙腈‑磷酸水、乙腈‑甲酸水、乙腈‑甲酸四氢呋喃水溶液中的一种，采用梯度洗脱95％B(0min)～65％B(90min)；检测条件：DAD检测器，检测波长230～400nm；柱温：20～35℃；流速：0.8～1.2mL/min；进样量：10～20μL。

2.权利要求1所述的处理方法，其中，色谱柱采用规格为250mm×4.6mm，5μm的Thermo SCIENTIFIC Hypersil GOLD、Hypersil ODS2、Kromasil^TM C₁₈和Agilent Eclipse Plus C₁₈色谱柱。

3.权利要求1所述的处理方法，其中，步骤1)中，取药材粉末约0.4g，精密称定，精密加入40％甲醇25mL，称重，超声提取30min，放置到室温后，再称重，用溶剂补足减失的重量，滤过，取滤液以0.45μm微孔滤膜滤过。

4.权利要求1所述的处理方法，其中，流动相：乙腈(A)‑0.1％甲酸0.05％四氢呋喃水溶液(B)；洗脱梯度：95％B(0min)～95％B(5min)～90％B(10min)～87％B(30min)～80％B(50min)～78％B(60min)～75％B(65min)～65％B(90min)；流速为1.0mL/min；采用DAD检测器，检测波长245nm；柱温25℃；进样量20μL。

5.一种利用指纹图谱评价小秦艽花药材质量的方法，包括以下步骤：

建立标准指纹图谱，包括：a)供试品溶液的制备：分别制备10个不同批次的小秦艽花样品供试品溶液，取样品粉末，精密称定，置150mL具塞锥形瓶中，精密加入0～100％甲醇25mL，称重，超声提取20～60min，放置到室温后，再称重，用溶剂补足减失的重量，滤过，取滤液以0.45μm微孔滤膜滤过，备用；b)对照品溶液的制备：称取1)5‑羟基‑2‑吡啶羧酸、2)5‑羟基糠醛、3)2‑糠酸、4)马钱素、5)间羟基苯甲酸、6)龙胆苦苷、7)木犀草素‑6‑C‑β‑D‑葡萄糖‑7‑O‑β‑D‑葡萄糖苷、8)獐牙菜苷、9)芹菜素‑6‑C‑β‑D‑葡萄糖‑7‑O‑β‑D‑葡萄糖苷、10)木犀草素‑6‑C‑β‑D‑吡喃葡萄糖苷、11)芹菜素‑6‑C‑β‑D‑吡喃葡萄糖苷共11种对照品，用甲醇溶解定容，制成一定浓度的单一对照溶液，微孔滤膜0.45μm滤过，备用；c)色谱条件：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；流动相：甲醇‑水，乙腈‑水，乙腈‑磷酸水，乙腈‑甲酸水，乙腈‑甲酸‑四氢呋喃水溶液，采用梯度洗脱95％B(0min)～65％B(90min)；检测条件：DAD检测器，检测波长230～400nm；柱温：20～35℃；流速：0.8～1.2mL/min；进样量：10～20μL；d)用相似度评价软件计算10个样品的相似度，从中确定一个相似度最高的作为标准指纹图谱；

用上述相同的方式获得一个待评价样品的指纹图谱；

用前述相似度评价软件评价所述待评价样品指纹图谱和所述标准指纹图谱的相似度，相似度大于0.9则判定所述待评价样品质量符合要求。

6.权利要求5所述的处理方法，其中，色谱柱采用规格为250mm×4.6mm，5μm的Thermo SCIENTIFIC Hypersil GOLD、Hypersil ODS2、Kromasil^TMC₁₈、Agilent Eclipse Plus C₁₈色谱柱。

7.权利要求5所述的处理方法，其中，步骤1)中，取药材粉末约0.4g，精密称定，精密加入40％甲醇25mL，称重，超声提取30min，放置到室温后，再称重，用溶剂补足减失的重量，滤过，取滤液以0.45μm微孔滤膜滤过。

8.权利要求5所述的处理方法，其中，流动相：乙腈(A)‑0.1％甲酸0.05％四氢呋喃水溶液(B)；洗脱梯度：95％B(0min)～95％B(5min)～90％B(10min)～87％B(30min)～80％B(50min)～78％B(60min)～75％B(65min)～65％B(90min)；流速为1.0mL/min；采用DAD检测器，检测波长245nm；柱温25℃；进样量20μL。

9.权利要求8所述的方法，其中，指纹图谱包含19个共有峰，各峰的保留时间分别为：4.00，8.20，10.46，11.76，12.00，12.69，14.79，18.52，19.93，22.04，22.62，23.40，23.89，25.64，30.61，32.40，41.32，54.25，58.33。

10.权利要求9所述的方法，其中，所述19个共有峰的相对峰面积分别为2.929，0.177，5.354，0.122，0.189，0.438，1.000，1.791，0.822，0.401，0.578，0.161，0.280，0.534，0.306，0.902，0.692，0.414，0.678。