[发明专利]蒙药小秦艽花指纹图谱建立方法以及质量评价方法

说明书

本发明涉及一种蒙药小秦艽花指纹图谱的建立方法，包括：1)供试品溶液的制备：取药材粉末0.4g，置150mL具塞锥形瓶中，加40％甲醇25mL，称重，超声提取，放置到室温后，再称重，用溶剂补足减失的重量，滤过，取滤液以0.45μm微孔、滤膜滤过；2)色谱条件：色谱柱：Thermo SCIENTIFIC Hypersil GOLD；流动相：乙腈(A)‑0.1％甲酸水溶液(含0.05％四氢呋喃)(B)，采用梯度洗脱95％B(0min)～95％B(5min)～90％B(10min)～87％B(30min)～80％B(50min)～78％B(60min)～75％B(65min)～65％B(90min)；流速：1.0mL/min；检测条件：DAD检测器，检测波长：245nm；柱温：25℃；进样量：20μL。本发明利用HPLC建立蒙药小秦艽花指纹图谱，提供一种较全面评价蒙药小秦艽花药材质量的方法。

技术领域

本发明涉及药物分析领域，具体涉及药材指纹图谱建立方法和药材质量评价方法。

背景技术

近年来，国内外对民族药的重视程度与日俱增，迫切需要对药物的质量标准进行控制，以确保研究用药更加稳定可靠。由于对蒙药的了解不足(基源、采收加工、用药部位等)，导致市场上品种混乱，所以建立全面有效地质量控制方法势在必行，保证用对药，用好药。

小秦艽花为龙胆科(Gentianaceae)龙胆属(Gentiana)秦艽组达乌里秦艽(Gentiana dahurica Fisch.)的干燥花，广泛分布于陕西、甘肃、宁夏、内蒙古、新疆、山西、河北等地，多生长于田边、路旁、河滩、水沟边、向阳山坡等地。小秦艽花入蒙药，蒙药名为呼和-朱力根-其木格，具有清热、解毒、止咳、祛痰的功效，主治肺热咳嗽，咽喉热，咽喉肿痛，毒热，瘟热等症。

小秦艽花为蒙医临床常用药，收载于《中华人民共和国卫生部药品标准》(蒙药分册)，且质量标准项下仅限于显微鉴别和化学鉴别方法，相关文献报道的含量测定也仅有龙胆苦苷等环烯醚萜类成分，并不能保证用药的安全性和有效性。指纹图谱技术作为天然药物提取物及其制剂的质量控制方法已达成国际共识，是一种综合的鉴定手段，专属性强，稳定性、重复性好，能较全面的评价药材的真实性、优良性。因此，本发明利用高效液相色谱法构建了蒙药小秦艽花的指纹图谱，并对不同产地的多批次小秦艽花进行分析确定了该药材的标准指纹图谱，建立一种稳定可靠的蒙药小秦艽花质量控制方法。

发明内容

本发明提出一种小秦艽花指纹图谱的建立方法，包括以下步骤：

1)供试品溶液的制备：取药材粉末，精密称定，置150mL具塞锥形瓶中，精密加入0～100％甲醇25mL，称重，超声提取20～60min，放置到室温后，再称重，用溶剂补足减失的重量，滤过，取滤液以0.45μm微孔滤膜滤过，备用；

2)将供试品溶液注入高效液相色谱仪中，采用的色谱条件为：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；流动相选自甲醇-水、乙腈-水、乙腈-磷酸水、乙腈-甲酸水、乙腈-甲酸四氢呋喃水溶液中的一种，其中最优选乙腈(A)-0.1％甲酸和0.05％四氢呋喃的水溶液(B)；洗脱梯度：95％B(0min)～95％B(5min)～90％B(10min)～87％B(30min)～80％B(50min)～78％B(60min)～75％B(65min)～65％B(90min)；检测条件：DAD检测器，检测波长230～400nm；柱温：20～35℃；进样量：10～20μL。

作为优选，色谱柱采用规格为250mm×4.6mm，5μm的

Thermo SCIENTIFIC Hypersil GOLD、Hypersil ODS2、Kromasil^TM C₁₈和AgilentEclipse Plus C₁₈色谱柱。