[发明专利]具有抗体药物抗性的通用型CART/TCRT细胞及其构建方法

摘要

本发明属于基因工程与合成生物学领域，具体涉及一种具有抗体药物抗性的通用型CART/TCRT细胞及其构建方法，所述通用型CART/TCRT细胞是具有嵌合抗原受体和T细胞受体的异体T细胞，所述T细胞受体α、β链和CD52分子被敲除；所述T细胞受体α、β链和CD52分子的敲除技术为CRISPR技术；所述通用型CART/TCRT细胞既保留了肿瘤特异抗原的靶向性，又排除了GvHD和排斥的问题，并减弱对抗体药物Alemtuzumab的敏感度，可以作为一种通用型的简易，低成本，高活性CART/TCRT细胞制剂使用。

主权项

1.具有抗体药物抗性的通用型CART或TCRT细胞的构建方法，其特征在于，所述通用型CART或TCRT细胞是具有嵌合抗原受体或T细胞受体的异体T细胞，所述通用型CART或TCRT细胞的T细胞受体α、β 链和CD52分子被敲除；所述敲除采用CRISPR技术；所述CRISPR技术所使用的sgRNA和crRNA序列为：sgRNA‑TCRα选自以下序列：sgRNA‑TCRα‑2:GCTGGTACACGGCAGGGTCA（SEQ ID NO.2）sgRNA‑TCRα‑3:GTCAGGGTTCTGGATATCTG（SEQ ID NO.3）sgRNA‑TCRα‑8:TGGATTTAGAGTCTCTCAGC（SEQ ID NO.8）sgRNA‑TCRα‑9:TCTCTCAGCTGGTACACGGC（SEQ ID NO.9）sgRNA‑TCRα‑10:AGAGTCTCTCAGCTGGTACA（SEQ ID NO.10）；sgRNA‑TCRβ选自以下序列：sgRNA‑TCRβ‑1:GAGCAGCCGCCTGAGGGTCT（SEQ ID NO.11）sgRNA‑TCRβ‑2:GAGCTGGTGGGTGAATGGGA（SEQ ID NO.12）sgRNA‑TCRβ‑3:GCTGTCAAGTCCAGTTCTAC（SEQ ID NO.13）sgRNA‑TCRβ‑4:GGCTCTCGGAGAATGACGAG（SEQ ID NO.14）sgRNA‑TCRβ‑5:GGAGAATGACGAGTGGACCC（SEQ ID NO.15）sgRNA‑TCRβ‑6:GGCGCTGACGATCTGGGTGA（SEQ ID NO.16）sgRNA‑TCRβ‑7:GTTGCGGGGGTTCTGCCAGA（SEQ ID NO.17）sgRNA‑TCRβ‑8:GCAGTATCTGGAGTCATTGA（SEQ ID NO.18）sgRNA‑TCRβ‑10:GGCTCAAACACAGCGACCTC（SEQ ID NO.20）；sgRNA‑CD52选自以下序列：sgRNA‑CD52‑1:CCTACTCACCATCAGCCTCC（SEQ ID NO.21）sgRNA‑CD52‑2:GCATCCAGCAACATAAGCGG（SEQ ID NO.22）sgRNA‑CD52‑3:GTTATGGTACAGATACAAAC（SEQ ID NO.23）sgRNA‑CD52‑4:CACCATCAGCCTCCTGGTTA（SEQ ID NO.24）sgRNA‑CD52‑5:GTTATGGTACAGATACAAAC（SEQ ID NO.25）；crRNA‑TCRα为以下序列：crRNA‑TCRα‑9:ATTCTCAAACAAATGTGTCACAA（SEQ ID NO.34）；crRNA‑TCRβ选自以下序列：crRNA‑TCRβ‑3:GCCCTATCCTGGGTCCACTCGTC（SEQ ID NO.37）crRNA‑TCRβ‑4:AGCCATCAGAAGCAGAGATCTCC（SEQ ID NO.38）；crRNA‑CD52选自以下序列：crRNA‑CD52‑2:TCCTGAGAGTCCAGTTTGTATCT（SEQ ID NO.40）crRNA‑CD52‑3:TATCTGTACCATAACCAGGAGGC（SEQ ID NO.41）。