[发明专利]具有抗体药物抗性的通用型CART/TCRT细胞及其构建方法

权利要求书

1.具有抗体药物抗性的通用型CART或TCRT细胞的构建方法，其特征在于，所述通用型CART或TCRT细胞是具有嵌合抗原受体或T细胞受体的异体T细胞，所述通用型CART或TCRT细胞的T细胞受体α、β 链和CD52分子被敲除；

所述敲除采用CRISPR技术；

所述CRISPR技术所使用的sgRNA和crRNA序列为：

sgRNA-TCRα选自以下序列：

sgRNA-TCRα-2:GCTGGTACACGGCAGGGTCA（SEQ ID NO.2）

sgRNA-TCRα-3:GTCAGGGTTCTGGATATCTG（SEQ ID NO.3）

sgRNA-TCRα-8:TGGATTTAGAGTCTCTCAGC（SEQ ID NO.8）

sgRNA-TCRα-9:TCTCTCAGCTGGTACACGGC（SEQ ID NO.9）

sgRNA-TCRα-10:AGAGTCTCTCAGCTGGTACA（SEQ ID NO.10）；

sgRNA-TCRβ选自以下序列：

sgRNA-TCRβ-1:GAGCAGCCGCCTGAGGGTCT（SEQ ID NO.11）

sgRNA-TCRβ-2:GAGCTGGTGGGTGAATGGGA（SEQ ID NO.12）

sgRNA-TCRβ-3:GCTGTCAAGTCCAGTTCTAC（SEQ ID NO.13）

sgRNA-TCRβ-4:GGCTCTCGGAGAATGACGAG（SEQ ID NO.14）

sgRNA-TCRβ-5:GGAGAATGACGAGTGGACCC（SEQ ID NO.15）

sgRNA-TCRβ-6:GGCGCTGACGATCTGGGTGA（SEQ ID NO.16）

sgRNA-TCRβ-7:GTTGCGGGGGTTCTGCCAGA（SEQ ID NO.17）

sgRNA-TCRβ-8:GCAGTATCTGGAGTCATTGA（SEQ ID NO.18）

sgRNA-TCRβ-10:GGCTCAAACACAGCGACCTC（SEQ ID NO.20）；

sgRNA-CD52选自以下序列：

sgRNA-CD52-1:CCTACTCACCATCAGCCTCC（SEQ ID NO.21）

sgRNA-CD52-2:GCATCCAGCAACATAAGCGG（SEQ ID NO.22）

sgRNA-CD52-3:GTTATGGTACAGATACAAAC（SEQ ID NO.23）

sgRNA-CD52-4:CACCATCAGCCTCCTGGTTA（SEQ ID NO.24）

sgRNA-CD52-5:GTTATGGTACAGATACAAAC（SEQ ID NO.25）；

crRNA-TCRα为以下序列：

crRNA-TCRα-9:ATTCTCAAACAAATGTGTCACAA（SEQ ID NO.34）；

crRNA-TCRβ选自以下序列：

crRNA-TCRβ-3:GCCCTATCCTGGGTCCACTCGTC（SEQ ID NO.37）

crRNA-TCRβ-4:AGCCATCAGAAGCAGAGATCTCC（SEQ ID NO.38）；

crRNA-CD52选自以下序列：

crRNA-CD52-2:TCCTGAGAGTCCAGTTTGTATCT（SEQ ID NO.40）

crRNA-CD52-3:TATCTGTACCATAACCAGGAGGC（SEQ ID NO.41）。

2.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述嵌合抗原受体为靶向CD19、CD20、CD22、CD30、CD33、CD38、CD123、CD138、CD171、MUC1、AFP、Alpha folate receptor、CEA、PSCA、PSMA、Her2、EGFR、IL13Rα2、GD2、NKG2D、EGFRvIII、CS1、BCMA或Mesothelin的嵌合抗原受体。